COJUGACION

OBJETIVO

 Conocer el proceso por el cual se puede transferir material genético en bacterias mediante el fenómeno de conjugación así como comprender el mecanismo de cómo esto ocurre.

OBJETIVOS PARTICULARES

 Identificar al DNA como portador de la información genética

 Conocer los mecanismos por los que una bacteria puede adquirir un plásmido

 Reconocer a la conjugación bacteriana como un fenómeno de transferencia horizontal de material genético

 Entender el mecanismo por el cual se realiza la conjugación bacteriana

HIPÓTESIS

Si la cepa E. coli W3110/F´KmTn3 posee un plásmido extracromosómico de tipo F´ (el cual antes estuvo integrado al cromosoma y después se escindió llevándose consigo genes bacterianos) entonces esta cepa puede actuar como célula donadora en un proceso de conjugación bacteriana y transferir el factor F’ junto con genes bacterianos a una cepa se comprobará la conjugación bacteriana mediante la transferencia de un marcador genético, la resistencia a la kanamicina, utilizando un marcador genético de resistencia a estreptomicina para la cepa receptora, con lo que se espera que la cepa conjugante pueda crecer tanto en un medio con estreptomicina, como en uno con kanamicina.

RESULTADOS

Se preparó una mezcla de conjugación con 300L de un cultivo de E. coli JM1252Str (cepa receptora resistente a la estreptomicina) y 120L de un cultivo de E. coli W3110/F´KmTn3 (cepa donadora resistente a la kanamicina) y posteriormente se sembró por estría en una caja Petri con medio Luria-agar 2% dividida en 3 partes iguales, E. coli JM1252Str (R), E. coli W3110/F-KmTn3 (D) y la mezcla de conjugación (C). Siguiendo el siguiente esquema:

A continuación, se muestran los resultados obtenidos después de parchar 50 colonias con la cepa receptora y conjugante en medios con estreptomicina y kanamicina, para comprobar el éxito de la conjugación; sin embargo, en nuestro caso no hubo conjugación, pues no obtuvimos colonias conjugantes.

Figura 1. Luria-Estreptomicina cepa Receptora

Se observa crecimiento, por lo que se sabe nuestra cepa receptora es resistente a estreptomicina.

Figura 2. Luria-Kanamicina cepa Receptora

No hay crecimiento bacteriano debido a que nuestra cepa receptora no es resistente a kanamicina.

Figura 3.Luria-Estreptomicina cepa Conjugante

Se observa crecimiento, lo que indica presencia de bacterias resistentes a estreptomicina.

Figura 4.Luria-Kanamicina cepa Conjugante

No hay crecimiento bacteriano, lo que indica

que la conjugación no fue exitosa.

ANÁLISIS DE RESULTADOS

Las bacterias son microorganismos con una extraordinaria capacidad de adaptación a diferentes condiciones ambientales; para comprender esta propiedad es importante conocer las bases de su genética, es decir, cómo está organizada la información genética, cómo regulan su expresión y que mecanismos de transferencia de información genética poseen. Toda la información genética esencial para la vida de la bacteria está contenida en una única molécula de DNA de doble cadena, circular, generalmente de tamaño pequeño y covalentemente cerrado conocido como cromosoma bacteriano; sin embargo, muchas bacterias poseen además DNA extracromosómico denominado DNA plasmídico que portan información genética para una variedad de funciones no esenciales para la célula en condiciones normales de crecimiento. La importancia de los plásmidos radica en que le confieren nuevas propiedades fenotípicas como resistencia a antibióticos, metales, capacidad de adaptación a otros ambientes e incluso pueden contener genes que le permiten expresar moléculas de adhesión a los tejidos del huésped en situaciones de infección.

Así pues, las bacterias pueden transferir información de forma horizontal a través de tres mecanismos: Transformación, Conjugación y Transducción; es esta ocasión este procedimiento experimental trató únicamente el mecanismo de conjugación en la que, entre otras características, debe haber contacto entre una célula donadora y otra receptora, este contacto es mediado por el pili tipo IV (codificado por genes presentes en el plásmido F, también llamado factor de fertilidad) presente en la bacteria donadora, el cual tiene 6nm de diámetro y se puede extender hasta varios micrómetros de la superficie celular, los plásmidos conjugativos pasan a través de un poro

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