CRMATOGRAFIA

DESARROLLO DE UN METODO POR CROMATOGRAFIA EN CAPA

FINA INSTRUMENTAL PARA ANALISIS CUANTITATIVO DE ACIDO

ACETILSALICILICO.

S.MENNICKENT1*, M.VEGA2, C.G.GODOY1, T.YATES1

1Departamento de Farmacia, Facultad de Farmacia, Universidad de Concepción, Casilla

237, Concepción, Chile.

2Departamento de Bromatología, Nutrición y Dietética, Facultad de Farmacia, Universidad

de Concepción, Casilla 237, Concepción, Chile.

(Recibido: Octubre 14, 2000 - Aceptado: Agosto 14, 2000)

RESUMEN

Se desarrolló y validó un método por cromatografía en capa fina instrumental (HPTLC) para cuantificar ácido acetilsalicílico.

La validación del método indicó que éste es lineal entre 100 y 600 ng/mancha, con un coeficiente de regresión de 0,996. Presentó buena repetibilidad y reproducibilidad (desviación estándar relativa entre 2,1 y 3,5% y entre 4,8 y 6,0%, respectivamente) y una exactitud promedio de 99%. Además, demostró ser selectivo para el principio activo ensayado, lo que lo hace adecuado para su análisis cuantitativo.

Palabras claves: HPTLC (cromatografía en capa fina instrumental), análisis cuantitativo, ácido acetilsalicílico, validación, medicamentos.

ABSTRACT

A High Performance Thin Layer Chromatography (HPTLC) method was developed and validated to determine quantitatively acetylsalicylic acid.

The results proved that the method is linear between 100 and 600 ng/spot, with repeatability (RSD = 2,1-3,5%), reproducible (RSD = 4,8-6,0%), accurate (99%) and selective for tested sustance. In conclusion, it is an adequate method for its quantitative analyses.

Keywords: HPTLC (High performance thin layer chromatography), quantitative analysis, acetylsalicylic acid, validation, drugs.

INTRODUCCION

El ácido acetilsalicílico es el analgésico-antiinflamatorio-antipirético más usado en todo el mundo. Se estima que la cantidad de este fármaco consumida solo en los Estados Unidos es del orden de las 200.000 toneladas al año.1)

Producto de su estructura química es estable en aire seco, pero en contacto con la humedad se hidroliza lentamente 1,2,3,4), degradación que depende principalmente de la presión de vapor de agua y de la temperatura (factores medioambientales).4)

Por esto es importante cuantificar el ácido acetilsalicílico presente en sus especialidades farmacéuticas, como modo de asegurar una terapia adecuada.5,6)

La cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) es el método de elección para la mayoría de los protocolos de análisis de medicamentos.7) Sin embargo, ya que se requiere analizar un gran número de especialidades farmacéuticas del principio activo, y, por ende numerosas muestras, sin que ello demande un tiempo considerable y un alto costo, es que en el presente trabajo se valida y propone un método analítico por HPTLC para cuantificar ácido acetilsalicílico. Esta técnica posee importantes ventajas sobre otros métodos cromatográficos, pues no requiere de purificaciones exhaustivas, utiliza cantidades mínimas de solventes, es una metódica rápida y, además, por ser un sistema abierto, permite analizar distintas muestras y diferentes analitos en forma simultánea, lo que se traduce en economía de tiempo, materiales y reactivos. 8)

PARTE EXPERIMENTAL

MATERIALES Y REACTIVOS:

Para el estudio se utilizó ácido acetilsalicílico estándar USP. Todos los reactivos fueron de calidad proanálisis.

Las soluciones de ácido acetilsalicílico se prepararon en acetonitrilo/ácido fórmico (99:1) como solvente. 2)

CROMATOGRAFIA:

La cromatografía se realizó en placas HPTLC de sílica gel F254, previamente lavadas con metanol y activadas a 130ºC por 30 minutos.

La siembra de las muestras se realizó en bandas de 3 mm mediante el uso de un aplicador semiautomático Linomat IV.

Se probó como fase móvil acetato de etilo + metanol + ácido acético glacial (80+19+1, v/v)9), y ciclohexano +cloroformo + ácido acético glacial (60+5+5, v/v)10). Los Rf fueron de 0,8 y de 0,15, respectivamente. La longitud de desarrollo fue de 5 cm, en un tiempo aproximado de 10 minutos para la primera y de 2 cm, en un tiempo aproximado de 17 minutos para la segunda fase móvil. Se eligió la segunda, ya que ésta permite visualizar mejor las manchas, las cuales quedan más separadas del frente de solvente. Se utilizaron cámaras de desarrollo verticales.

Las lecturas se realizaron por densitometría. Para esto se utilizó un espectrodensitómetro Scanner Camag III acoplado a un computador con software CATS versión 4,05, y como fuente de radiación una lámpara de deuterio.

ESPECTROGRAMA DE ABSORCION:

La longitud de onda de máxima absorción (231 nm) se determinó realizando un espectrograma in situ del compuesto cromatografiado.

VALIDACION DEL METODO:

Los parámetros analíticos que se validaron fueron linealidad, límites de detección y de cuantificación, precisión, exactitud, selectividad y robustez.

La validación se llevó a cabo según normas internacionales 2,11,12) y utilizando estimadores estadísticos apropiados (desviación estándar relativa, t de student, análisis de varianza).11,13)

LINEALIDAD:

Para establecer el rango de linealidad del método se elaboró una curva de calibración mediante la aplicación de concentraciones del estándar entre 100 y 600 ng por mancha. Las siembras se hicieron en triplicado.

LIMITES DE DETECCION Y DE CUANTIFICACION:

Para su obtención se trabajó con concentraciones de analito que estuviesen en la parte inferior del rango lineal de la curva de calibración. Para esto se prepararon soluciones de concentraciones de 50, 75 y 100 ng/uL, cada una de las cuales se sembró tres veces (1 uL cada vez).

PRECISION:

Para este estudio se utilizaron soluciones de ácido acetilsalicílico de 100, 300 y 500 ng/uL. Estas cubren el rango lineal determinado (siembra: 1uL).

Para evaluar la repetibilidad del método se prepararon cinco soluciones de cada concentración, cada una de las cuales se sembró tres veces.

Para evaluar la reproducibilidad se trabajó con una solución de cada concentración, cada una de las cuales se sembró tres veces y durante cinco días.

EXACTITUD:

Se evaluó utilizando comprimidos comerciales de ácido acetilsalicílico. Se prepararon seis soluciones, de las cuales a tres se les hizo recarga basal con ácido acetilsalicílico estándar, para calcular el porcentaje de recuperación.

SELECTIVIDAD:

Para evaluar la selectividad del método se preparó una solución de ácido acetilsalicílico más ácido salicílico. Se utilizó el ácido salicílico por tratarse del principal producto de degradación

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