CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS DE ALTA RESOLUCIÓN: DETERMINACIÓN DE CAFEÍNA EN DIVERSAS MUESTRAS

GRUPO: 2701A/C            FECHA DE ENTREGA:3/Agosto/2021      CARRERA: QUÍMICA

Procedimiento experimental

Fase móvil: Preparar la fase móvil en una proporción 30:70 de metanol: agua y ajustarla a pH 3.5 con HCI de concentración 1 M. Colocarla en ultrasonido de 10-15 minutos y filtrar a través de una membrana de 0.44 µm con vacío (se debe preparar aproximadamente un litro).    

Stock de cafeína

Se pesaron 25.5 mg de estándar de cafeína 98.5% Pureza en un vaso de precipitados de 50 mL , se disolvieron con  15 de fase movil y se transfirió a un matraz volumetrico de 25 mL (Sol. 1). Se transfirió una alícuota de 1 ml de la Sol.1 a un matraz volumetrico de 10 mL y se llevó a la marca de aforo con fase movil (Sol. 2). Se transfirió una alícuota de 5 ml de la Sol.2 a un matraz volumetrico de 25 mL y se llevó a la marca de aforo con fase movil (Sol. Stock cafeína).

Concentracions Sol. Stock cafeína

25.5 mg ( ) =  = 1004.7 mg/L  sol. 1 [pic 2][pic 3]

= 100.47  sol. 2[pic 4][pic 5]

= 20.094 ppm sol. Stock cafeina [pic 6]

Tabla 1. Curva de Calibración de Cafeína

Las muestras 1 y 2 fueron previamente desgasificadas, se agitaron fuertemente durante 30 minutos, luego se calentaron por otros 15 minutos y se colocaron en ultrasonido durante una hora.

Muestra Coca cola

Se transfirio a un matraz volumetrico de 10 mL, una alícuota de 5 mL de la bebida desgasificada y llevó a volumen con fase móvil ( Sol.M1). Se transfirió a un matraz volumetrico de 10 mL, una alícuota de 1 mL de la Sol. M1 y se llevó a volumen con fase móvil (Muestra 1). Se filtró  a través de una membrana (poro 0.45 μm) y se coloco 1 mL de la solución en un vial de HPLC. Se colocó el vial en un baño de ultrasonido durante 5 minutos. Finalmente se inyectó la solución en el cromatografo a las condiciones establecidas.

Marbete de lata de coca cola - 34 mg de cafeína en 354 mL.

Muestra de chocolate negro

Se pesaron 49.5 gramos de chocolate negro y se solubilizaron en 250 mL de agua caliente. Se transfirio a un matraz volumetrico de 10 mL, 2 mL de la solución de chocolate y  se llevó a volumen con fase móvil ( Sol.M2). Se transfirio a un matraz volumetrico de 10 mL, 4 mL de la Sol. M4 y se llevó a volumen con fase móvil (Muestra 2). Se filtró  a través de una membrana (poro 0.45 μm) y se coloco 1 mL de la solución en un vial de HPLC. Se colocó el vial en un baño de ultrasonido durante 5 minutos. Finalmente se inyectó la solución en el cromatografo a las condiciones establecidas.

Marbete de  chocolate negro- 43 mg de cafeína en 100 gramos de chocolate negro

Sistema 1:  = 2.0094 ppm[pic 7]

Sistema 2:  = 4.0188 ppm[pic 8]

Sistema 3:  = 6.0282 ppm[pic 9]

Sistema 4:  = 8.0376 ppm[pic 10]

Sistema 5:  = 10.047 ppm[pic 11]

Tabla 2. Resultados de los sistemas de la curva de Calibración

1. Justifique la técnica de fase reversa empleada en la practica para la determinación de cafeína.

La fase reserva se caracteriza en tener una fase estacionaria no polar y la fase movil relativamnete polar, en la parte experimental se tiene como fase movil 30:70 Metanol-Agua y la fase estacionaria al no se polar, como la cafeina que se clasifica como un alcaloide, una clase de compuestos naturales que contienen nitrogeno, presnetan las propiedades de las aminas, es decir son compuestos orgànicos con propiedades bàsicas, subclase de aminas conocidas como Xantinas.

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