Carbapenemasas

Tres clones distintos de carbapenem-resistentes Acinetobacter baumannii con alta diversidad de carbapenemasas aisladas de pacientes en dos hospitales en Kuwait

Resumen

Objetivos

Este estudio se realizó para investigar la relación clonal de multirresistente (MDR) Acinetobacter baumannii aislados recogidos de los pacientes en dos hospitales de enseñanza en Kuwait.

Materiales y métodos

Aislamientos consecutivos clínicamente significativos de A. baumannii obtuvo de los pacientes en el Mubarak (36) y se estudiaron Adan (58) hospitales más de un período de 6 meses. Estos aislados se identificaron utilizando métodos moleculares, y su susceptibilidad antimicrobiana se determinó por el método de Etest. El mecanismo de resistencia a carbapenem se investigó por PCR, y electroforesis en gel de campo pulsado (PFGE) se utilizó para determinar la relación clonal de MDR aísla.

Resultados

De los 94 aislamientos estudiados, 80 (85,1%) fueron multirresistentes (MDR). El A. baumannii clon PFGE A y A1 subclone fueron los más frecuentes en los pacientes infectados con MDR aislamientos. Cincuenta y cinco (94,8%) y 15 (41,7%) de la MDR aislados de los hospitales Adan y Mubarak, respectivamente, pertenecían al clon PFGE A; aislados en este grupo mostraron mayores tasas de resistencia a los antibióticos de los aislamientos forman otros grupos. De los 94 aislamientos, 40 (42,6%) fueron resistentes a imipenem o meropenem o a ambos carbapenem-resistentes A. baumannii (CRAB). La mayoría de los aislados CRAB (29/40 ó 72,5%) realizaron bla genes, que codifican para la MBL (VIM-2 y IMP-1) enzimas. Dos cepas albergaba bla OXA-23 .

Conclusión

Se aislaron tres clones distintos de CRAB, proporcionando evidencia de una alta diversidad de carbapenemasas entre nuestros aislamientos geográficamente relacionados.

Introducción

El interés por Acinetobacter baumannii ha crecido rápidamente en las últimas dos décadas, principalmente como resultado de la aparición y el brote de (MDR) cepas resistentes a múltiples fármacos. A. baumannii representa una causa importante de infecciones nosocomiales incluyendo septicemia, neumonía asociada a ventilación mecánica y las infecciones del tracto urinario. La bacteria suele ser intrínsecamente resistentes a múltiples agentes antimicrobianos, y la resistencia lactama β-a está más comúnmente asociado con la producción de altos niveles de cefalosporinasas producidas naturalmente. Sin embargo, adquirió metalo-β-lactamasas (MBL), enzimas que confieren resistencia a los carbapenémicos, se han reportado. Informes recientes han demostrado que la MBL, como el PER-1, VIM-2 y IMP-1, son frecuentes en Turquía y Corea, y son una fuente cada vez mayor de la resistencia en estos países. La difusión de los OXA-23 y OXA-58 carbapenemasas entre A. baumannii aislados También se ha informado en los hospitales en Argentina. Además, los hospitales en el Reino Unido han experimentado brotes con tres clones generalizados: el clon "Sudeste", OXA-23 clon 1 y OXA-23 clon 2, los dos últimos son consistentemente resistente a imipenem y meropenem.

Recientemente, las infecciones por MDR A. baumannii cepas se han convertido en un grave problema en algunos hospitales en Kuwait, en particular los hospitales Mubarak Al-Kabeer y Al-Adan, donde estas cepas son los segundos patógenos aislados con mayor frecuencia, sobre todo en la UCI. El hospital Mubarak Al-Kabeer es el hospital de enseñanza primaria y sirve como una referencia y centro médico secundario, mientras que el hospital Al-Adan, también un hospital de enseñanza, es un centro médico secundario, situado a 16 km de distancia, en la parte sur de la país. Este estudio fue diseñado para investigar la relación clonal de la carbapenem-resistentes A. baumannii cepas aisladas de pacientes infectados en estos hospitales.

Materiales y métodos

Aislamientos bacterianos

Todos consecutivo clínicamente significativa A. baumannii aislados recogidos de los pacientes con infecciones probadas que requieren tratamiento antimicrobiano se recogieron del hospital Mubarak Al-Kabeer (MKH, Kuwait) y el hospital Al-Adan (ADH, Kuwait), entre mayo y octubre de 2007. Sólo una cepa por paciente fue probado, y se excluyeron todas las cepas duplicadas. Identificación primaria se realizó utilizando el sistema API 20 NE (BioMérieux, l'Etoile, Francia) y se confirmó por PCR usando los siguientes cebadores: 5'-CTAATAATTGATCTACTCAAG-3 '( bla OXA-69A f ) y 5'-CCAGTGGATGGATGGATAGATTATC-3 ' ( bla OXA-69 r ) para el bla OXA-69 gen, un oxacillinase de origen natural en A. baumannii . Los aislamientos fueron etiquetados con abreviaturas en serie que refleja el hospital al que fueron recabados (1-58 ADH y 59-94 MKH).

Prueba de susceptibilidad

Las pruebas de sensibilidad de los aislamientos se realizó mediante la determinación de las concentraciones mínimas inhibitorias (CMI) de 11 antibióticos de uso común en nuestros hospitales para tratar las infecciones gram negativas utilizando el Etest (AB Biodisk, Solana, Suecia). Brevemente, una suspensión bacteriana con una turbidez de 1,0 de McFarland se preparó inoculando una única colonia de una noche (16-18 h) cultivo puro de la bacteria en PBS estéril. El uso de un hisopo de algodón estéril desechable empapado en el inóculo, un 150 mm Mueller-Hinton agar (Becton Dickinson, Sparks, MD, EE.UU.) placa se inoculó en tres direcciones y se extendió para cubrir completamente toda la superficie. Seis tiras Etest de los antibióticos se colocaron en cada placa. Las placas inoculadas se incubaron a continuación a 37 ° C durante 24 h. Una placa inoculada sin antibióticos también se incluyó en cada ejecución para comprobar la pureza de la suspensión. Se calcularon los valores de MIC basado en la concentración de los antibióticos en el que la zona elíptica de la inhibición intersectado la tira de Etest. Los resultados se interpretan de acuerdo con los criterios sugeridos por el CLSI. Escherichia coli ATCC 25922 y Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 fueron incluidos en cada corrida como controles.

La detección de metalo-β-lactamasas (MBL) y oxacillinase (OXA)

Las cepas que muestran no susceptibilidad a los carbapenemes se cribaron para la producción de MBL mediante la prueba de aproximación de disco como se ha descrito por Lee et al. [13] y la MBL Etest (AB Biodisk, Suecia). La detección de la bla IMP-1 , bla VIM-1 , bla VIM-2 , bla RRP-1 , bla OXA-23 , bla OXA-24 y bla OXA-58 genes en aislamientos resistentes a carbapenem se realizó en condiciones estándar de PCR utilizando cebadores se informó anteriormente.

Typing por electroforesis en gel de campo pulsado (PFGE)

Aislamientos resistentes a carbapenem se tipificaron por PFGE utilizando Apa1 enzima de acuerdo

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