Centrifugacion y homogenizacion

Objetivo

Identificar el homogeneizador indicado para cada muestra biológica, en nuestro caso la espinaca, utilizando diversos homogeneizadores realizando la centrifugación para ver la relación entre diferencia de volúmenes y concentración de la solución

Analisis de resultados

A cada equipo se le asignó una muestra en nuestro caso fue la espinaca, antes de comenzar con un fraccionamiento celular es importante tomar en cuenta algunos parámetros físicos y químicos para la homogeneización tales como el pH y la concentración de la solución, solvente o agente abrasivo para ayudar a romper las membranas y liberar sus contenidos. Todo el material y las soluciones que se utilizan para realizar el homogenizado deben estar previamente enfriados a 4°C para mantener la integridad de los organelos para evitar la actividad enzimática y 5ml de solución isotónica  NaCl 0.9%, la cual es una combinación de sales similares en composición a  las que se encuentran en el interior a la célula.

Se realizó el homogeneizado de la espinaca, con 3 métodos (Virtis, Potter y Mortero), esto se muestra en la tabla no. 2 tipo de homogeneizador, de los cuales se determinó que el mejor homogeneizador fue el mortero, este se utiliza para disgregar sustancias, mediante la presión ejercida, suelen ser de porcelana. La técnica consiste presionar con la mano del mortero sobre una de las paredes del mismo una pequeña cantidad del material a triturar.

El método de homogeneización por mortero, resulto ser eficiente para los tejidos duros (vegetales), ya que “las fuerzas que se emplean para desorganizar la mayoría de las células animales son débiles mientras que las necesarias para romper las células vegetales y bactrianas pueden ser muy grandes, debido a la presencia de paredes celulares en estos organismos hace que la técnica de desintegración sea más difícil, ” en este caso las espinacas que utilizamos están compuestas por paredes celulares, requieren de dicho rigor en la fuerza empleada para su homogeneización en el mortero.

En las diferentes muestras de los demás equipos, de igual manera se tenía que comprobar cual homogeneizador era el mejor de acuerdo a la textura, en el tejido blando, como cerebro de res e hígados de pollo el mejor fue el potter, para una textura semiblanda como el musculo de res y corazones de pollo, el virtis fue el mejor homogeneizador y para un tejido duro como la espinaca el mortero fue el mejor estos resultados se pueden ver en la tabla no.1 mejor homogeneizador para cada muestra.

En el empleo de la homogeneización de potter, resulto ser una técnica eficiente para la unificación de los tejidos blandos como son el cerebro y el hígado, ya que “homogeneizadores como el potter se usan para la reducción controlada del tamaño de partícula, especialmente material biológico blando, las fuerzas de cizallamiento generadas por el movimiento de rotación del émbolo en un tubo de presión provoca la reducción del tamaño, dándoles un trato suave y moderadamente fuerte a las muestras; los factores determinantes son el espacio entre la cabeza del mortero y el tubo, la velocidad de rotación y la viscosidad del medio”, así pues para los tejidos blandos el potter proporciona una efectividad en la conservación de las distintas y especificas propiedades de dichas muestras bilógicas.

Por otra parte la homogeneización con virtis resulto ser muy útil para los tejidos semiduros, ya que estos mismos “tienden a ser muy elásticos y resistentes a la vez y es por esta misma propiedad que se es muy difícil homogeneizarlos con el empleo del mortero o Potter”, el virtis “al consistir esencialmente en una serie de hojas afiladas propulsadas a grandes velocidades brinda fuerzas efectivas de corte para este tipo de tejidos semiduros”, ayudando también en algunos casos a la conservación intacta de las propiedades de las muestras.

Como anteriormente se mencionamos comprobó  que el mortero es el mejor homogeneizador para la espinaca, ya que al realizar la centrifugación pudimos apreciar que la pastilla era completamente homogénea a diferencia de los otros tubos que tenían trozos enteros de espinaca.

 Dentro de la centrifugación también hay que tomar en cuenta los parámetros físicos, ya que separa aumentando la fuerza gravitacional en base al peso, densidad y tamaño de los componentes. [LODISH, 2006].

La centrifugación es un proceso de separación que utiliza la acción de la fuerza centrífuga para promover la aceleración de partículas en una mezcla de sólido-líquido. Dos fases claramente distintas se forman en el recipiente durante la centrifugación. Los centrifugadores se encargan de la separación de las partículas mediante fuerza de aceleración gravitacional que se logra gracias a una rotación rápida. Este proceso puede provocar la sedimentación o suspensión de las partículas llamado sobrenadante.

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