Condromucoproteinas

Localización de la condromucoproteína en el cartílago

G. Loevi, Canadá.     

El anticuerpo contra la condromucoproteína del cartílago porcino fue empleado para colorar cortes del cartílago costal, articular y traqueal por el procedimiento de fluorescencia. Se compararon los resultados  obtenidos la de la estafa de absorción del azul alciano en condiciones determinadas. Se demostró la presencia de la condromucoproteína  en el borde lacunar. En la matriz cercana la coloración fluorescente fue  menos  marcada, pero sí vio asociada mucha regiones estafadores particularmente interterritoriales. El azul alciano daba a veces posición opuesta a la producida por el método de fluorescencia: una coloración fuerte y bastante extensa, de la zona muy perilacunar pero débil en  las  regiones interrelaciones territoriales.

Al tratar los cortes estafa hialuronidasa, la coloración fluorescente del anticuerpo sí volvía más intensa y más amplia, mientras que la absorpci6n del azul alciano cesaba. La acción de la hialuronidasa fue  más marcada en cortes fijados. El efecto de la hialuronidasa avíale atribuirse a la degradación y a la eliminación del polisacárido, facilitando así el acceso del anticuerpo a la porción proteínica de la condromucoproteína. Las diferencias regionales de coloración pudieran deberse a una composición diferente del polímero condromucoproteínico en varios territorios o, quizás, a la propiedad del volumen excluido.

La localización histoquímica de polisacáridos de ácido implica dificultades de fijación y normalmente las reacciones de especificidad incierta. Por lo tanto, la fase acuosa utilizada en la mayoría de los fijadores es susceptible de

Eluir al menos parte del material, mientras que la mayoría de reacciones de tinción carecen de especificidad. El último problema últimamente ha sido atacado con éxito por el uso de la técnica de azul alciano sal controlada (scott y dorling, 1965). El presente trabajo describe la aplicación de una técnica inmunohistoquímica a este problema. La condromucoproteína (cmp) en el cartílago fue detectada por la aplicación de anticuerpo dirigido contra esta sustancia. Las características inmunológicas de la reacción y la naturaleza del antígeno y el anticuerpo han sido totalmente descritos en otra parte (loewi y muir, 1965; muir, 1958). El antisuero contra cmp es predominantemente dirigido contra la parte proteica, por esta razón estudios paralelos se han llevado a cabo con la técnica de azul  alciano para demostrar la acidez del polisacárido en la parte del complejo de cmp.

Material y Métodos

El cartílago fue tomado a partir de cerdos totalmente crecido inmediatamente después de la muerte en la masacre de la casa, incluyendo especímenes de cartílago costal, cartílago de la tráquea, y de articular cartílago de la articulación del tobillo. Partes de cada espécimen se congelaron instantáneamente en una mezcla de co2 sólido y etanol, y otra parte se fijó en etanol al 95 por ciento a 40 c. Algunas muestras fueron fijadas en una mezcla de 1 parte de 40 de formaldehido y 9 partes de etanol absoluto a -20 ° c. El material fijo fue subsiguientemente embebido en cera de parafina y se cortaron secciones a las 5. El método seguido con etanol frío es para que el tejido fuera fijado según sainte-marie (1962). El material no fijado, congelado fue cortado en un armario criostato y después se secó rápidamente antes de un tratamiento adicional.

Secciones de  aorta de cerdo fueron cortados por el etanol frío fijado en el tejido.

Tejido de embrión de cerdo se obtiene a partir de una camada en el útero.

La tinción fluorescente se realiza por la técnica sándwich. Anticuerpos contra el cartílago de la laringe cerdo cmp fueron

Obtenidos en conejos (loewi y muir, 1965). Este suero anti a una dilución de 1:5 en solución salina tamponada de coon´s fue aplicado a las secciones durante 30 min., seguido de lavado por 30 min. Después de esto, la fluoresceína conjugada de cabra-anticonejo gamma-globulina se estratificó sobre las secciones durante 30 min, seguido de otro lavado de al menos 30 min. Controles tratados con un antisuero de conejo no relacionado, se incluyeron en cada experimento.

Se utilizó el método de azul alciano para polisacáridos ácidos en las secciones de tejido fijado o no fijado. Molaridades diferentes de MgCl2 se utilizan, pues el punto crítico es diferente para los varios mucopolisacáridos ácidos (scott y dorling, 1965).

Resultados

Secciones de cartílago costal tratados con anticuerpos mostraron tinción específica de los bordes de lagunas condrocitos circundantes. Esta región fue sin mancha en las secciones de control, mientras que algunas manchas de condrocitos se ven con frecuencia en el control, así como en secciones del tratado con anticuerpo. La zona que rodea  racimos de condrocito, más allá del borde manchado, era a menudo, pero no siempre, visto para ser sin mancha.

Contrasta fuertemente con la sección manchada azul alciano de cartílago costal tomado del mismo pequeño bloque de tejido y corte y preparado de la misma manera como la sección fluorescente. Aquí el circulo-lacunar el espacio está fuertemente manchado, en contraste a la siguiente zona, conocida como la región interterritorial. Esto mostró tinción punteada con anticuerpo, mientras que siendo prácticamente sin mancha. Esta tinción de contraste era, sin embargo, no marcada tan bien en otros tipos de cartílago o incluso en todas las partes de las secciones de cartílago costal examinados.

El efecto de pre-tratamiento de las secciones con hialuronidasa (seravac laboratories, ltd.) También mostró diferentes resultados cuando se examina por el anticuerpo y azul-tinción alciano. El tratamiento durante 2 horas causó marcado aumento generalizado de la tinción fluorescente, mientras que una distribución de tinción regional podría ser todavía reconocerse. Fueron retenidas algunas manchas azul alciano en las regiones lacunares. Después de 24 horas, sin embargo, el azul alciano no fue aceptado, mientras que la fluorescencia era muy brillante y generalizada. 

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