Cromatologia

INTRODUCCION

El objetivo de este laboratorio fue conocer la cromatografía como técnica de separación de mezclas de sustancias, sus características y los factores que en ella intervienen.

La Cromatografía es una técnica de análisis químico que se usa para separar sustancias puras de mezclas complejas. La palabra Cromatografía significa "Escribir en Colores" ya que cuando fue desarrollada los componentes separados eran colorantes. Esta técnica depende del principio de adsorción selectiva (no confundir con absorción). La cromatografía fue descubierta por el botánico ruso, Mikhail Tswett en 1906, pero su uso no se generalizó hasta la década de 1930. Tswett separó los pigmentos de las plantas (clorofila) vertiendo extracto de hojas verdes en éter de petróleo sobre una columna de carbonato de calcio en polvo en el interior de una probeta. A medida que la solución va filtrándose por la columna, cada componente de la mezcla precipita a diferente velocidad, quedando la columna marcada por bandas horizontales de colores, denominadas cromatogramas. Cada banda corresponde a un pigmento diferente.

En toda separación cromatográfica hay una fase estacionaria y una fase móvil. La fase estacionaria puede ser un sólido o un líquido que se queda fijo en la misma posición. La fase móvil puede ser un líquido o un gas que corre a través de una superficie y de la fase estacionaria.

MARCO TEORICO

La cromatografía consiste en separar componentes de sustancias integrantes de una mezcla en movimiento por medio de reparto o adsorción sobre una superficie móvil o estacionaria. Se trata de un proceso de análisis cualitativo porque una vez separada la muestra en sus componentes cromotográficamente, cada uno de ellos puede ser caracterizado e identificado (¿Hay o no hay?), y de análisis cuantitativo porque también es posible determinar la cantidad de cada componente de la muestra (¿Cuánto es lo que hay?). Dentro de la cromatografía se pueden establecer 2 mecanismos.

Separación por adsorción (cromatografía de adsorción)

Diferente afinidad de los componentes de la muestra sobre la superficie de un sólido activo (componentes con polaridad baja o media).

Separación por reparto (cromatografía de reparto)

Diferente solubilidad en fases estacionaria y móvil (componentes con polaridad media o alta).

2.1. TIPOS DE CROMATOGRAFÍA

2.1.1. Cromatografía en papel. Es un proceso muy utilizado en laboratorios para realizar análisis cualitativos ya que pese a no ser una técnica muy potente no requiere de ningún tipo de equipamiento.

2.1.2. Cromatografía en capa fina. Es un proceso basado en la preparación de una capa, uniforme, de un absorbente mantenido sobre una placa, la cual puede ser de vidrio, aluminio u otro soporte. Los requisitos son un absorbente, placas, un dispositivo que mantenga las placas durante la extensión, otro para aplicar la capa de absorbente, y una c{amara en la que desarrollen las placas cubiertas.

2.1.3. Cromatografía de gas. Es una técnica cromatográfica en la que la muestra se volatiza y se inyecta en la cabeza de una columna cromatográfica. La elución se produce por el flujo de una fase móvil de gas inerte.

2.1.4. Cromatografía líquida de alta performance (High performance liquid chromatograpy) – HPLC. Es un tipo de cromatografía en columna utilizada frecuentemente en bioquímica y química analítica. El HPLC es una técnica utilizada para separar los componentes de una mezcla basándose en diferentes tipos de interacciones químicas entre las sustancias analizadas y la columna cromatográfica.

2.2. PARTES DE UN SISTEMA CROMATOGRÁFICO

Fase móvil. Lo constituyen los solventes orgánicos que son sustancias fluidas de diferente polaridad. Por ejemplo: metanol, cloroformo, etanol, etc.

Fase estacionaria o soporte. Lo constituyen las sustancias adsorbentes que generalmente se depositan sobre la placa de vidrio o columna de vidrio, en el caso de la cromatografía en papel, el papel Whatman.

Cámara de saturación. Es un recipiente con una tapa que cierra herméticamente donde se realiza el cromatograma.

Reveladores. Si todos los compuestos son coloreados, bastará la inspección ocular para distinguir las manchas, pero en la mayoría de los casos, los compuestos son incoloros y por ello invisibles en el cromatograma, siendo necesario utilizar métodos físicos como la luz UV o químicos, como los vapores de Iodo, u otros reactivos especiales que permitan hacer visibles los compuestos separados.

Aplicadores. Son micropipetas utilizadas en la aplicación de las sustancias a cromatografiar.

Muestras. Son las sustancias a cromatografiar y pueden ser: la muestra patrón o estándar y la sustancias o muestra problema.

2.3. LA RELACIÓN DE FLUJO.

Es una constante, es características para cada compuesto, siempre que se efectúe la determinación en las mismas condiciones.

Se define como la relación existente entre la distancia alcanzada por la muestra problema (frente de soluto) y la distancia recorrida por el solvente (frente de solvente).

Rf=(Frente de soluto)/(Frente de solvente)

Frente de soluto. Es la distancia que alcanza o recorre la muestra en una cromatografía.

Frente de solvente. Es la distancia que alcanza o recorre la fase móvil en una cromatografía.

OBJETIVOS

Al término de la práctica el alumno debe de ser capaz de:

Conocer los fundamentos de la cromatografía en capa fina.

Realizar una cromatografía en capa fina del ácido acetil salicílico, para comparar la pureza de la muestra.

MATERIALES

Tubo de prueba

Beaker

Capilares

Mechero

Placa Aluminio con Silicagel

Cámara de revelado

Lápiz y regla.

Soporte: Silicagel G activado

(cromatofolio)

Sistema de solvente: Bz – AcOEt (2:1)

PROCEDIMIENTO

CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA

Técnica:

A 0.5cm del borde inferior y superior del portaobjeto (cromatofolio) trazar una línea con lapiz. En el borde inferior marcar

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