Cuantificación Espectrofotométrica De Aminoácidos Y Proteínas

Cuantificación Espectrofotométrica De Aminoácidos Y Proteínas

Ensayos para estudiantes: Cuantificación Espectrofotométrica De Aminoácidos Y Proteínas

INTRODUCCIÓN

Las sustancias pueden absorber energía radiante, la absorción de las radiaciones ultravioletas, visibles e infrarrojas, depende de la estructura de las moléculas, además es una característica para cada sustancia química (1). La absorción de la luz, en este campo de longitudes de onda, da lugar al salto de electrones desde un nivel de energía a otro entre los niveles de mayor energía, o más externos, de los átomos y de las moléculas. Los compuestos orgánicos que poseen dobles enlaces conjugados o anillos aromáticos, los iones de los metales de transición, especialmente los iones complejos formados con reactivos orgánicos, son compuestos químicos que absorben en la región ultravioleta-visible y se pueden determinar cuantitativamente midiendo la absorción o absorbancia (3).La fenilalanina, la tirosina y el triptófano absorben la luz UV, aunque la fenilalanina en menor grado. Lo que explica las características de absorbancia fuerte de luz por parte de las proteínas a una longitud de onda de 280 nm. (1)

OBJETIVOS

 Conocer la cuantificación de sustancias mediante la Ley de Lambert-Beer

 Comprender la capacidad de absorbancia de longitudes de onda de los aminoácidos glicina y triptófano y la proteína seroalbúmina de bovino SAB.

 Conocer e integrar conocimientos sobre la espectrofotometría.

 Reconocer y cuantificar los aminoácidos y proteínas en solución.

 Leer la absorbancia de los aminoácidos glicina, triptófano y la proteína seroalbúmina de bovino a 280 nm.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

Se utilizaron cuatro tubos de ensayo para incorporar 3 mL de solución de NaCl 0,9% p/v, Glicina, Triptófano y la proteína Seroalbúmina de bovino (SAB) por separado en cada uno de los tubos. Con el espectrofotómetro preparado para utilizar, se incorpora la solución de NaCl 0,9% p/v en una cubeta de cuarzo la cual fue la primera en poner en el espectrofotómetro y se reguló su absorbancia en 0,000, determinando el valor obtenido como un 100%, sin retir

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ar la cubeta de cuarzo con esta solución, se procedió luego con cada uno de los tubos restantes a repetir el procedimiento para medir la absorbancia de cada una de las muestras. Con esto se determinaron las concentraciones en mg/ml de cada una, utilizando los coeficientes de extinción molar de cada especie a 280 nm y la Ley de Lambert-Beer.

RESULTADOS

En base al experimento práctico, los datos que arrojó el espectrofotómetro muestran que la absorbancia de la glicina es de 0,016, el triptófano

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