DETERMINACIÓN DE MICROORGANISMOS INDICADORES DE CONTAMINACIÓN FECAL.

PRÁCTICA DE LABORATORIO N° 04

DETERMINACIÓN DE MICROORGANISMOS INDICADORES DE CONTAMINACIÓN FECAL.

PARTE I

I. INTRODUCCIÓN.

Los métodos utilizados para el aislamiento y el recuento de los gérmenes patógenos son menos eficaces, cuando estos se encuentran en pequeño número en los alimentos, y sobre todo cuando abundan otros microorganismos. Estas dificultades en la determinación de gérmenes patógenos han sido la causa de que se utilicen microorganismos de enumeración más fácil y cuya presencia en cierto número se considera como una indicación que los alimentos estuvieron expuestos a condiciones que pudieron determinar la llegada a los mismos de microorganismos peligrosos y o permitir la proliferación de especies patógenas o toxicas.

Se han utilizado diversos microorganismos indicadores según los fines perseguidos:

• Bacteria aerobias mesófilas: los recuentos altos de gérmenes viables indican frecuentemente materias primas contaminadas, condiciones inadecuadas de tiempo/temperatura durante la producción o la conservación de los alimentos, o nos indican de antemano que el producto va a alterarse muy pronto por la cantidad de microorganismos presentes. Las bacterias aerobias mesófilas pueden considerarse por lo general como organismos indicadores, si bien su significado es menor preciso en cuanto a la posibilidad de que el alimento pueda producir una intoxicación alimentaria que el de los recuentos de los organismos entéricos indicadores.

• Organismos entéricos indicadores: Escherichia coli y coliformes (Bacterias del grupo Coli – aerogenes).

• Otros indicadores: entre otros microorganismos que se citan a veces como indicadores podemos mencionar Streptococus salivarius, para la contaminación oral y Staphylococcus aureus para la contaminación a partir de la boca, fosas nasales y piel, sin embargo no se utilizan de modo amplio como indicadores, posiblemente porque tienen ciertos inconvenientes.

II. OBJETIVOS

a. Conocer y aplicar técnicas de identificación de microorganismos en alimentos.

b. Interpretar el significado de la presencia de microorganismo indicadores en alimentos.

III. MATERIALES Y REACTIVOS.

Medios de cultivo:

• Caldo Lactosado Verde Brillante Bilis 2% volumen de 10 ml en tubos de 16 x 150 mm conteniendo tubos de fermentación invertidos (75 x 10 mm).

• Agar Violeta Rojo Bilis o Agra Endo en placas Petri de vidrio

• Caldo tritptonado.

• Agua peptonada 0.1%, solución salina peptonada.

Materiales:

• Pipeta de vidrio graduadas de 1 ml.

• Pipeta de vidrio graduadas de 10 ml.

• Matraces Erlenmeyer de 250 ml.

Equipos:

• estufa.

• Cocina eléctrica.

• Autoclave.

• Horno eléctrico.

• Vortex.

• Pipetas automaticas.

Otros.

• Mechero.

• Algodón, gasa.

• Hilo pabilo.

• Marcador indeleble.

• Papel craft.

• Solución de Azul de metileno.

Material biológico.

• Muestra de alimento (solido).

IV. METODOLOGIA.

4.1. DETERMINACIÓN DEL NUMERO MÁS PROBABLE (NMP) DE COLIFORMES:

1. Preparar las muestras de alimentos de acuerdo al procedimiento recomendado para la preparación y dilución de la muestra.

2. Pipetear 1 ml de cada dilución decimal de la muestra a cada uno de los tres tubos de Caldo Lactosado Verde Brillante Bilis 2%.

3. Incubar los tubos a 35 – 37°C por 24 y 48 horas.

4. Después de las 24 horas, anotar los tubos que muestren producción de gas. Reincubar los tubos que no muestren producción de gas en 24 horas adicionales.

5. Después de 48 horas, anotar los tubos que muestran producción de gas. Si es necesario efectuar pruebas para la determinación de coliformes, seleccionar los tubos gas positivo y continuar con el procedimiento descrito para la Determinación de Bacterias Coliformes de Origen Fecal.

6. Seleccionar la dilución más elevada en la que los tres tubos son positivos para producción de gas y las siguientes dos diluciones más altas.

7. Para obtener el MNP, referirse a la tabla del NMP y anotar el NMP basándose en los niveles de disolución de la muestra y el numero de tubos positivos confirmados de cada dilución seleccionada.

4.2. DETERMINACIÓN DE BACTERIAS COLIFORMES DE ORIGEN FECAL.

1. Inocular una asada de cada uno de los tubos gas positivos (del procedimiento anterior), a un tubo que contiene CLVBB y a otro con caldo triptonado.

2. Incubar los tubos a 44°C + _ 0.1 °C.

3. Leer la producción de gas en tubos con CLVBB después de 24 y 48 horas de incubación.

4. Luego de 24 horas de incubación efectuar la prueba del Indol en los tubos de Caldo Triptonado.

Los cultivos que muestren producción de gas en CLVBB y formación del indol en caldo Triptonado son positivos para coliformes fecales.

V. RESULTADOS:

• Esquematizar los procesos efectuados en cada experiencia de la práctica.

• Interpretar y analizar los resultados obtenidos.

PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS

MUESTRAS: helado, jugo y agua.

1. Se tiene los tubos con CLVBB al 2%.

2. Se procede a agregar helado en el disolvente se homogeniza (solución al 10-1).

3. Luego se realiza las diluciones al 10-2 y 10-3, por último se pasa a los tubos conteniendo CLVBB 3 repeticiones por disolución.

• Luego de dejar en incubación por 24 a 48 horas a temperaturas desde 35 – 37 °C, se obtiene los siguientes resultados.

Cuadro 01. Resultados de las muestras tomadas en clase

NIVELES DE DILUCIÓN 10-1 10-2 10-3

Muestra analizada:

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