De todas las moléculas deimportancia biológica

De todas las moléculas deimportancia biológica, las proteínas son delas que más se estudian por ser las másversátiles. Muchas proteínas tienen actividadbiológica, como por ejemplo las enzimas ylas inmunoglobulinas. Otras son proteínas detransporte que facilitan o controlan elmovimiento de sustancias a través de lasmembranas en las células. Otras actúan comohormonas (ej: insulina) y otras como parteestructural de las células (ej: microtúbulos ymicrofilamentos del citoesqueleto). ElBiólogo molecular puede obtener proteínas apartir de fraccionamiento celular. Una vez sesepara la célula en sus componentes serocede a aislar las roteínas ara su estudio.Lo más importante a seguir en la purificación es la recuperacion de laproteína que nos interesa. Esto puede hacerse por ensayos enzimáticos si es unaenzima, bioactividad si es no-enzimática o algún otro método que sea conveniente,como electroforesis o cromatografía de columna.Lo segundo es conocer la cantidad de proteína presente en la muestra.Existen varios métodos de análisis cuantitativo. El que se use dependerá de lacantidad de proteína esperada, si la muestra analizada debe ser recuperada o si noimporta que la muestra sea destruída.

PRÁCTICA 6DETERMINACIÓN DE PROTEÍNA TOTALDeterminación del Nitrógeno según Kjeldahl

Desde hace más de 100 años se está utilizando el método Kjeldahl para la determinacióndel nitrógeno en una amplia gama de muestras. La determinación del nitrógeno Kjeldahlse realiza en alimentos y bebidas, carne, piensos, cereales y forrajes para el cálculo delcontenido en proteína. También se utiliza el método Kjeldahl para la determinación denitrógeno en aguas residuales, suelos y otras muestras.El método Kjeldahl sirve para determinar el contenido en nitrógeno en muestrasorgánicas e inorgánicas. Se basa en la digestión de la muestra en ácido sulfúricoconcentrado a ebullición, con la adición de un catalizador. La muestra se digiere hastadisolución y oxidación de la muestra. El nitrógeno contenido en la muestra se convierteen Amonio Sulfato.Añadiendo un exceso de solución de sodio hidróxido, el ion amonio es liberado enforma de amoniaco, destilado y recogido sobre una solución de ácido bórico o sobre unasolución valorada de ácido sulfúrico. El amoniaco recogido es determinado con unasolución valorada de ácido o se valora por retroceso con solución de sodio hidróxido deconcentración conocida, si se recogió sobre ácido sulfúrico.

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