Detección de muestras de sangre manchadas quemadas con reactivos de aumento de la sangre que emiten luz

Detección de muestras de sangre manchadas quemadas con reactivos de aumento de la sangre que emiten luz

Academia Americana de Ciencias Forenses, 62ª Reunión Científica Anual, 26 de febrero de 2010

Peter Bilous, PhD; Marie McCombs, BS; Matt Sparkmon, BS; Jenn Sasaki, BS

Universidad Oriental de Washington (EWU), Departamento de Química y Bioquímica

226 Science Building, Cheney WA 990004-2440

INTRODUCCIÓN

Cuando los criminales ponen deliberadamente incendios o explosiones para cubrir sus actividades, las escenas del crimen resultantes

son muy difíciles de procesar. Los investigadores de la escena del crimen se enfrentan con la difícil tarea de localizar,

reconocer e identificar pruebas biológicas entre los escombros resultantes del incendio o explosión

(1). Las manchas biológicas y no biológicas pueden aparecer similares cuando son carbonizadas por las altas temperaturas

asociado con un incendio o una explosión (2,3). Se requieren pruebas de detección rápidas y sensibles para

los investigadores de la escena del crimen con la tarea de seleccionar material biológico relevante para

Análisis del ADN.

Los científicos forenses usan una variedad de pruebas de detección de sangre para detectar la presencia de sangre en el crimen

escenas (4,5). Normalmente, sólo las manchas que producen un resultado positivo con las pruebas de detección de sangre son

se recogieron para el posterior análisis de ADN. Sin embargo, cuando el autor había intentado limpiar o

eliminar las pruebas de sangre de una escena del crimen, los reactivos sensibles de

ser empleado para localizar cantidades residuales de sangre (6,7).

Luminol es un reactivo muy sensible de aumento de la sangre que es ampliamente utilizado para detectar trazas

de sangre en las escenas del crimen (8,9). Otro reactivo de mejora de la sangre, Bluestar®, utiliza una forma modificada

de la molécula de luminol para producir una emisión de luz azul basada en quimioluminiscencia muy brillante

(10, 11). Ambos reactivos de luminol y Bluestar® tienen una vida útil corta y deben prepararse justo antes

utilizar. Además, la escena del crimen debe ser oscurecida para ver las emisiones ligeras de corta duración.

Hemascein TM es un producto a base de fluoresceína que emite una luz verde basada en fluorescencia cuando

excitado con una intensa fuente de luz azul (12). Una ventaja práctica de este reactivo es el largo

vida útil de la solución de trabajo, varios meses cuando se almacena a temperaturas de refrigerador.

Fluorescein, un reactivo de mejora de la sangre relacionado con HemasceinTM, se mostró a superar a ambos

Bluestar® y luminol cuando se utilizan para detectar patrones de manchas de sangre quemados (3).

Una comparación cuantitativa de tres diferentes reactivos de aumento de la sangre emisores de luz: luminol,

Bluestar®, y HemasceinTM, se realizó en este estudio con el fin de evaluar su capacidad para detectar

manchas de sangre que habían sido expuestas al calor y al humo de un fuego.

MATERIALES Y MÉTODOS Muestras de sangre:
• Se eligió sangre canina para este estudio por razones de salud y seguridad, y por su similitud sangre humana en el recuento de glóbulos rojos y hemoglobina (13). Sangre canina en Los tubos Vacutainer® con EDTA como conservante se obtuvieron de Cheney Veterinary Clínica.

• Se prepararon diluciones en serie de sangre canina de 1:10 a 1: 10.000 usando distilación agua.

• Controle los frotis de manchas de sangre de aproximadamente 1 cm2  se prepararon sobre portaobjetos de cristal de microscopio utilizando 5 μl de una dilución 1:10 de sangre líquida.

• Se prepararon manchas de sangre quemadas usando 5 μl de la dilución 1:10 de sangre líquida y tratamiento térmico por exposición directa a la llama de un fuego de alcohol durante 1, 3 o 5 minutos (Figura 1). Manchas de sangre

se sometieron a temperaturas que oscilaban entre 400 y 600 ºC.

[pic 1]                           [pic 2]

Figuras 1a y 1b. Preparación de manchas de sangre quemadas: diapositivas de microscopio de vidrio con manchas de sangre se suspendieron boca abajo sobre una placa de Petri de vidrio de 10 cm de diámetro rellena con 10 ml de etanol para el experimento de quemadura.

Preparación del Reactivo de Mejora de la Sangre:

• El luminol se preparó de acuerdo con la formulación Grodsky, modificado con la adición de de hidróxido de sodio hasta una concentración final de 25 mM (10).

• Bluestar® se preparó fresco añadiendo los comprimidos de dos comprimidos a 125 ml de solución destilada agua según las instrucciones del fabricante (11).

 • Las soluciones HemasceinTM y las soluciones de trabajo se prepararon de acuerdo con las instrucción (12). Para el propósito de este estudio, se preparó un tampón de prueba justo antes de su uso por mezclando una parte de la solución de trabajo HemasceinTM con una parte de peróxido de hidrógeno al 3% Espectroscopía de Emisión:

 • Se utilizó un fluorómetro Bio-Rad VersaFluorTM para registrar las emisiones de luz. La intensidad de la emisiones de luz en unidades de fluorescencia relativa [RFU] se registró cada 7 segundos durante los 5 minuto.

 • Las emisiones de luz superiores a 20.000 RFU excedieron el límite de cuantificación del instrumento.

• Para análisis de sangre con luminol y Bluestar®, la fuente de luz de excitación del instrumento fue bloqueado y se utilizó un filtro de 460 ± 5 nm para medir las emisiones de luz.

• Para análisis de sangre con HemasceinTM, un filtro de excitación de 460 ± 5 nm y una emisión de 520 ± 5 nm filtro.

 • Para el análisis de muestras de sangre líquida, se mezcló una alícuota de 25 μl de sangre diluida con 2 ml de reactivo de aumento de la sangre en una cubeta de plástico transparente a los rayos UV.

• Para el análisis de las muestras de control y de manchas de sangre quemadas, se la diapositiva de cristal usando un hisopo de algodón humedecido con agua destilada. La mancha recogida fue colocado en una cubeta de plástico transparente a los UV que contiene 2 ml de reactivo de aumento de la sangre y mezclado por inversión.

 • Todos los análisis de sangre se realizaron por triplicado y los resultados promediados.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Tabla 1. Resumen de las emisiones máximas de luz obtenidas para la sangre líquida, control de manchas de sangre y

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