Determinacion del colesterol y acido urico

Índice

Introducción 3

Materiales 4

Procedimiento 5

Resultados ………………………………………………………………..6

Conclusiones………………………………………………………………7

Cuestionario 8

Bibliografía 9

Introducción

DETERMINACION DEL COLESTEROL Y ACIDO URICO

I- MARCO TEORICO

El colesterol es un esterol (lípido) que se encuentra en los tejidos corporales y en el plasma sanguíneo de los vertebrados. Se presenta en altas concentraciones en el hígado, médula espinal, páncreas y cerebro. Pese a tener consecuencias perjudiciales en altas concentraciones, es esencial para crear la membrana plasmática que regula la entrada y salida de sustancias que atraviesan la célula. El nombre de «colesterol» procede del griego χολή, kole (bilis) y στερεος, stereos (sólido), por haberse identificado por primera vez en los cálculos de la vesícula biliar por Michel Eugène Chevreul quien le dio el nombre de «colesterina», término que solamente se conservó en el alemán (Cholesterin). Abundan en las grasas de origen animal.

Ácido úrico en suero

Los humanos convierten los principales nucleótidos de purina, adenosina y guanosina, en ácido úrico. La adenosina se desamina inicialmente a inosina por la adenosina desaminasa. La fosforólisis de los enlaces N-Glicosídicos de la inosina y guanosina, se cataliza por la nucleósido de purina fosforilasa: se libera ribosa 1-fosfato y una base de purina. Posteriormente la Hipoxantina y la guanina forman Xantina en reacciones catalizadas por la xantina oxidasa y la guanasa respectivamente.

La xantina formada se oxida a ácido úrico en una segunda reacción catalizada por la xantina oxidasa. De esta forma, la xantina oxidasa proporciona un sitio potencial para la intervención farmacológica en los pacientes con hiperuricemia y gota.

La cantidad de ácido úrico depende de la ingestión dietética de purinas y de la velocidad del catabolismo de las purinas endógenas, o sea las formadas en el interior del organismo.

En situaciones normales se forman 5 gramos de purinas al día y solo 0.5 gramos se convierten en ácido úrico; por lo tanto, la mayor arte de las purinas formadas son reutilizadas.

Materiales

• Buffer fosfato pH 7.2 100 mM

• Colesterol Ester hidrolasa >150 U/l

• Colesterol oxidasa (recombinante) >100 U/l

• Peroxidasa >1000 U/l

• 4-Aminoantipirina 0.4 mM

• Acido p-hidroxibenzoico 10 mM

• Azida sódica 0.1 g/dl

• Estabilizantes y preservantes no reactivos c.s.

• Solución estándar:

• Colesterol en solución acuosa estabilizada 200 mg/dl

• Espectrofotómetro o fotocolorímetro de filtros capaz de medir absorbancia a 505 nm. (rango 500 - 550 nm.)

• Baño María

• Pipetas

• Micropipeta 10 a 200 ul Tips amarillo

• Pipetas 5 mL Suero

• Gradilla Estándar de ácido úrico 10 mL x grupo

• Tubos 3 x mesa Rvo Enzimático de acido úrico 10 mL x grupo

• Espectrofotómetro Baño María

Procedimiento

Determinación de colesterol

*Obtención de sangre

*Llevar la muestra inmediatamente al fotómetro

*Incubar a temperatura ambiente

*Obtención de suero

*leer en el espectotometro 505 nm (absorbancia)

*En el primer tubo (muestra) agregar suero 10ul, luego se agrega estander colesterol 1000ul

*En el segundo tubo (estandar) agregar estarder colesterol 10ul y colesterol enzimático 100ul

*En el tercer tubo (blanco) agregar colesterol enzimático 1000ul

Determinación del acido úrico

*Utilizar el reactivo estandar con la ayuda de una micropipeta

*En el primer tubo (muestra) agregar suero 25 ul

*En el segundo tubo (estandar) agregar estarder colesterol 25ul y colesterol enzimático 100ul

*En el tercer tubo (blanco) agregar colesterol enzimático 1000ul

Resultados

Blanco Standard Muestra

Muestra (ml) - - 0.01

Standard (ml) - 0.01 -

Reactivo (ml) 1.00 1.00 1.00

Cálculos:

FACTOR = 200

Absorbancia Standard

Colesterol (mg/dl)= Factor x Abs. Muestra

RANGO DE REFERENCIA 140 a 200 mg/dl

F= 10 = 68,87

0,145

AC. URICO = 68,87 X 0,021

AC. URICO = 1,45 mg/dl

E = 0,450 ABS

M= 0,254

Blanco Standard Muestra

Muestra (ml) - - 0, 025

Standard (ml) - 0, 025 -

Reactivo (ml) 1,00 1, 00 1, 00

Cálculos:

FACTOR = 10 mg/mL

Absorbancia

...