Determinación De La Actividad De Una Proteasa

PRÁCTICA N° 09

“DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD DE UNA PROTEASA”

I. INTRODUCCIÓN

Las proteasas son enzimas que rompen los enlaces peptídicos de las proteínas, la cual usan una molécula de agua para hacerlo. Se encuentran naturalmente en organismos vivos, donde se usan para la digestión molecular y la reducción de proteínas no deseadas. Las proteasas pueden romper ya sea enlaces peptídicos específicos (Proteólisis limitada), dependiendo en la secuencia de aminoácidos de la proteína, o pueden reducir un péptido completo a aminoácidos (Proteólisis ilimitada).

Schöenheimer en 19472, reconoció el papel central de las enzimas proteolíticas en el mantenimiento de los niveles proteicos intracelulares, estableciendo así el equilibrio entre las velocidades de síntesis y degradación de proteínas. De esta manera, la actividad proteolítica se convierte en una mecanismo regulador que mantiene los niveles de proteína constantes durante los procesos celulares. (Schimke y Doley 1970).

Actualmente se sabe que la degradación de determinadas proteínas es el punto de control de diversos procesos biológicos, algunos tan fundamentales como la progresión del ciclo celular (Hirsch y col., 1989). De esta manera, la actividad proteolítica se convierte en un mecanismo regulador que mantiene normales los niveles proteicos celulares.

Objetivos:

- Identificar algunas propiedades fisicoquímicas de las enzimas como proteínas.

- Identificar la presencia de proteasas en distintas partes de una fruta.

- Determinar la acción de la temperatura sobre la actividad de proteasa en función del tiempo.

II. MATERIALES

- Baño María

- Refrigeradora

- Balanza

- Piña

- Gelatina

- Cuchillos

- Gasa

- Tubos de ensayo

- Morteros

- Pipetas

- Embudos

- Vasos de precipitación

- Agua destilada

III. PROCEDIMIENTO

- Preparación de la muestra:

o Pesar 36g. de gelatina en 180ml de agua caliente, dejarlos enfriar en 18 tubos.

o Triturar las partes de la piña en un mortero

o Filtrar cada muestra triturada.

- Acción de las bromelinas en la gelatina

PIÑA

CÁSCARA PULPA CORAZÓN

TUBOS I II III IV V VI VII VIII IX

3ml de filtrado (c/u) x x x x x x x x x

Baño maría por 10min. x x x

Baño maría por 30min. x x x

T° ambiente a 25°C x x x

Tubos con gelatina 10ml x x x x x x x x x

Transferir 2ml de filtrados al tubo con gelatina x x x x x x x x x

Incubar a 37°C por 1 hora x x x x x x x x x

Refrigerar de 5 a 30 minutos x x x x x x x x x

IV. RESULTADOS

- Se observó que en los tubos II, V, VIII la Bromelina no actuó porque la gelatina pudo cuajar.

- Estos tres tubos fueron calentados a 37 grados, lo que inhibió la acción de la Bromelina.

- Los tubos con gelatina con sabor no cuajó ninguno, a excepción del tubo VIII.

- Se puede observar que el colorante pudo haber inhibido la acción de la Bromelina

V. DISCUCIONES

o En la práctica se demostró la acción de Bromelina sobre la gelatinasa, de acuerdo al manual presentado en práctica.

o Según Yuliana Betancourt, la acción de la Bromelina se ve afectado por los cambios bruscos de temperatura, inclusive por el cambio de ph. Se observó en la práctica que la gelatina no cuajó a diferentes temperaturas, y además los colorantes de la gelatina alteraron el pH de la solución.

VI. CONCLUSIONES

o Se demostró

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