El estudio de los principios involucrados en el número total de microorganismos presentes en la muestra

tPRACTICA DE TECNICAS DE RECUENTO

OBJETIVO GENERAL

Adquirir las destrezas necesarias en la realización de recuentos microbianos para su aplicación en el ejercicio profesional farmacéutico.

OBJETIVOS PARTICULARES

Estudiar los principios involucrados en el recuento de microorganismos presentes en una muestra

Aprehender diversas técnicas de recuento (directas e indirectas) de microorganismos

Correlacionar las diferentes respuestas de las técnicas de recuento

MICROORGANISMOS

Cultivo masivo de Saccharomyces cerevisiae en agar YGC a 30C por 48 horas

MATERIALES

Erlenmeyer de 250 ml Estéril 6 unidades

Tubo de ensayo grandes estériles 50 unidades

Pipeta de 1 ml estéril 80 unidades

Pipeta de 5 ml estéril 10 unidades

Pipeta de 10 ml estéril 10 unidades

Probeta de 100 ml estéril 6 unidades

Asas de vidrio estériles 10 unidades

Cajas de Petri estériles 60 unidades

Cajas de Agar YGC 50 unidades

Agar YGC fundido 6 recipientes con 200 ml c/u

Solución Salina Isotónica (NaCl al 0,9% p/v) estéril 6 recipientes con 300 ml c/u

Recipiente con alcohol para quemar 6 unidades

Cámara de Neubauer 6 unidades

Pipeta Pasteur 6 unidades

Equipo de Filtración 1 unidad

Membrana de Filtración 0,45 m de poro y 47 mm de  6 unidades

Pinza de acero estéril 6 unidades

PROCEDIMIENTO

PREPARACION DE LAS SUSPENCIONES

En seis (6) cajas de agar YGC cultivar por extensión en superficie Saccharomyces cerevisiae e incubar por 48 horas a 30°C.

Adicionar a la caja 10 ml de Solución Salina Isotónica (SSI) estéril y cosechar el microorganismo con ayuda de un asa de vidrio (Suspensión Stock)

En un erlenmeyer estéril colocar aproximadamente 150 ml de SSI estéril y adicionar una pequeña fracción de la Suspensión Stock. Mezclar muy bien. Determinar el % de Transmitancia medido a 600 nm. Se agregará más Suspensión Stock de microorganismo o más SSI según se el caso para ajustar el valor de %T.

De la manera anterior, hacer seis suspensiones con los siguientes valores (aproximados) de % de Transmitancia: 10, 25, 40, 55, 70 y 85 %T.

PREPARACION DE DILUCIONES

Aliste 7 tubos de ensayo y con ayuda de la pipeta de 10 ml estéril coloque 9 ml de SSI estéril en cada uno, y márquelos 10-1, 10-2, y así sucesivamente hasta 10-7.

Con ayuda de una pipeta de 1 ml estéril tome 1 ml de la suspensión preparada, y colóquelo en el tubo mercado 10-1 y homogenice muy bien. De este tubo, con ayuda de otra pipeta

...