Espectofotometro

ESPECTOFOTÓMETRO

El espectrofotómetro, construido mediante procesos avanzados de fabricación, es uno de los principales instrumentos diagnósticos y de investigación desarrollados por el ser humano. Utiliza las propiedades de la luz y su interacción con otras sustancias, para determinar la naturaleza de las mismas. En general, la luz de una lámpara de características especiales es guiada a través de un dispositivo que selecciona y separa luz de una determinada longitud de onda y la hace pasar por una muestra. La intensidad de la luz que sale de la muestra es captada y comparada con la intensidad de la luz que incidió en la muestra y a partir de esto se calcula la transmitancia de la muestra, que depende de factores como la concentración de la sustancia.

La absorción de las radiaciones ultravioleta, visibles e infrarrojas depende de la estructura de las moléculas, y es característica para cada sustancia química. Cuando la luz atraviesa una sustancia, parte de la energía es absorbida; la energía radiante no puede producir ningún efecto sin ser absorbida.

El color de las sustancias se debe a que éstas absorben ciertas longitudes de onda de la luz blanca que incide sobre ellas y solo dejan pasar a nuestros ojos aquellas longitudes de onda no absorbida.

La espectrofotometría VIS-UV tiene una gran aplicación en las determinaciones cuantitativas en muchas áreas, las cuales, en su mayoría, en la actualidad están autorizadas por NOM (Norma Oficial Mexicana) y se publican ejemplos de las aplicaciones y determinaciones espectrofotométricas:

• Determinaciones en los análisis clínicos en sangre (mg/dl)

­ Glucosa

­ Urea

­ Creatinina

­ Ácido úrico

­ Colesterol

­ Proteínas

­ Bilirrubinas

­ Hemoglobina

­ Fosfatasa alcalina y acida

­ Fósforo

­ Calcio

­ Albúmina

• En el área microbiológica y bioquímica:

En el control de cinética enzimática (por ejemplo: como las siguientes enzimas: sacarosa, invertasa, fructofurnosidasa, etc.), determina los cambios por efecto de concentración de enzima, efecto por la concentración de sustrato, efecto causado por cambios de temperatura, efecto causado por los cambios de pH.

­ Determinación de fósforo en DNA.

­ Determinación del contenido de RNA (en el área de fermentaciones).

­ Determinación de digestibilidad in uitro (en el área de fermentaciones).

­ Determinación de concentración de alcoholes superiores (en el área de fermentaciones).

• En el área de análisis de alimentos:

­ Determinación de nitrógeno proteico.

PARTES DEL ESPECTROFOTÓMETRO:

EXTERNAS

• Chasis

• Porta cubeta

• Selector de filtro

• Selector de modo

• .Ajuste grueso

• Selector de longitud de onda

• Indicador de longitud de onda

• Pantalla

INTERNAS

• Fuente de luz: La fuente de luz ilumina la muestra química o biológica, pero para que realice su función debe cumplir con las siguientes condiciones: estabilidad, direccionalidad, distribución de energía espectral continua y larga vida.

Las fuentes de luz que puede tener un espectrofotómetro son:

- Lámpara de wolframio (también llamado tungsteno)

- Lámpara de arco de xenón

- Lámpara de deuterio que es utilizada en los laboratorios atómicos

• Monocromador: El monocromador de un espectrofotómetro aísla las radiaciones de longitud de onda deseada, logrando obtener luz monocromática. Un monocromador está constituido por las rendijas de entrada y salida, colimadores y el elemento de dispersión.

• Colimador: El colimador es un lente que lleva el haz de luz entrante con una determinada longitud de onda hacia un prisma, el cual separa todas las longitudes de onda de ese haz logrando que se re direccione hacia la rendija de salida.

• Compartimiento de muestra: En el compartimento de muestra es donde se lleva a cabo la interacción R.E.M. con la materia.

• Detector: El detector se encarga de evidenciar una radiación para que posteriormente sea estudiada y saber a qué tipo de respuesta se enfrentarán (fotones o calor).

• Registrador: Convierte el fenómeno físico en números proporcionales al analito en cuestión.

• Fotodetectores: Los fotodetectores de un espectrofotómetro perciben la señal en forma simultánea en 16 longitudes de onda y cubren al espectro visible, de esta manera se reduce el tiempo de medida y minimiza las partes móviles del equipo.

MANEJO DEL ESPECTOFOTÓMETRO

1. Enchufa y enciende el espectrofotómetro. Haz funcionar el equipo de cinco a diez minutos para permitir que se caliente.

2. Busca la perilla de longitud de onda que se encuentra al lado del compartimento de la muestra y gírala para establecer la longitud de onda.

3. Gira la rueda de filtros para seleccionar el filtro correspondiente. Utiliza el violeta para longitudes de onda entre 300 y 375 nm, el azul para longitudes de onda entre 375 y 520 nm, el amarillo para longitudes de onda entre 520 y 740 nm, y el rojo para longitudes de onda de 740 a más de 900 nm.

4. Pulsa el botón de modo que se encuentra al frente del espectrofotómetro para seleccionar el modo que muestra simultáneamente porcentajes de transmitancia y absorbancia.

5. Abre el compartimento

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