Evaluación seminal de porcinos

EVALUACION DEL MATERIAL SEMINAL PORCINO

PREPARACION DE DOSIS DE SEMEN

- Manipulación  del semen.

• Valoración

     (Análisis macroscópico)

     (Análisis microscópico)

- Dilución.

- Concentración.

- Envase.

- Conservación.

Valoración Macroscópica del Eyaculado:

Color: Blanco, cremoso, marfil.

        Amarillo, verde, rosado, castaño. (Köning, 1979)

Olor:        Poco olor, proteico neutro.

        Fuerte, específico. (Köning, 1979)

pH:        6.8 y 7.1 (Rillo,1982)

        pH disminuido. (Sorensen, 1982)

        Variaciones extremas. (Rillo, 1982  Singlenton y shelby, 1972)

Volumen: Se relaciona con la edad y manejo reproductivo, estado sanitario, etc.

La evaluación seminal es fundamental y ayuda a evitar problemas de fertilidad en los verracos, las características como volumen del eyaculado, color, concentración de espermas (número por ml), motilidad y morfología espermática deben ser analizadas de manera rutinaria y práctica, inmediatamente después de la recolección. (Rillo, 1996; Colenbrander y Kemp, 1990).

Motilidad Espermática ó en Masa:

Motilidad en Masa: Valoración de la cantidad de movimiento (0 – 100%).              

Movimiento progresivo. (Malmgren, 1997)

[pic 1]

Movilidad Espermática ó Individual:

Motilidad Individual: % de espermatozoides que se muevan. (Malmgren, 1997).

[pic 2]

Motilidad Individual: % de espermatozoides que se muevan

[pic 3]

La aglutinación son cúmulos de espermas (vivos o muertos) que pueden estar unidos a células epiteliales o entre si por la cabeza o cola. Se mide en cuatro grados (0 a 3) el grado 3 corresponde a mas de un 30 o 40% de espermas de la muestra aglutinados, se puede presentar asociado a otros parámetros como baja motilidad  y presencia de anomalías morfológicas.

En casos de aglutinación leve o nivel 1, esta desaparece al agregar al semen el diluyente.

CAUSAS DE AGLUTINACION:

Presencia de gel de glándulas bulbouretrales x mal filtrado, concentración elevada del eyaculado, mala calidad espermática, shok térmico del eyaculado, contaminación con células epiteliales o descamaciones, cambios en el ph del plasma seminal asociado a problemas en las glándulas accesorias del macho.

Morfología Espermática:

Determina la viabilidad del semen, y de acuerdo a su estudio da pautas para el establecimiento de causa o problemas de manejo.

Gota citoplasmática = señal de inmadurez

Cola plegada o en rollo = desarrollo insuficiente en el epidídimo.

Inspección del Acrosoma: (Intacto, alterado o perdido).

Solución salina o glutaraldeido (buffer). (Microscopio de luz brillante o microscopio de fase de contraste con 1000x)

Dilución 1:1 con solución manchante (5% eosina, 10% nigrosina en solución de citrato ( pH 7.4 )

Técnica de fluorescencia (lectinas , Propidio Iodado)  

EVALUACIÓN DE LA MORFOLOGIA ESPERMATICA:

Costo alto del equipo.

Células normales.

Cel con gotas    citoplasmáticas y cel con cola plegada.

Cel con cola enrollada.

Cel con cola doble, cabeza doble, tamaño y estructura anormales.

Buena muestra contiene < 10% de anomalías.

                                >20-25% se desecha.

Alteraciones del acrosoma < 10% no debe pasar del 15%.

Concentracion Espermatica:

Es el # espermatozoides por ml.

Uso de la cámara de NEUBAUER.

Uso del ESPECTROFOTOMETRO.

Concentración espermatica:

Ponga de 10-15 µl del esperma diluido debajo de la cobertura o cubreobjeto en cada uno de los lados de la cámara de Neubauer. Se pretende medir con la Cámara de NEUBAUER o HEMOCITOMETRO, la cantidad de espermas presentes en el eyaculado, por ello se llenan los compartimentos de la cámara para ello se debe diluir la muestra de espermas con agua, para poder contar entre 100 a 400 espermas en los 5 cuadrados seleccionados. La dilución exacta varía de acuerdo a la especie y a la concentración inicial del eyaculado, como se expresa a continuación.

Especies        Dilución        Volumen de Semen        Volumen de Agua 

  Bovino           101                               10 µl                                       1.0 ml

  Equino            21                               50 µl                                       1.0 ml

  Porcino            21                               50 µl                                       1.0 ml

  Ovino           201                               25 µl                                       5.0 ml

Enfocar el microscopio con el objetivo de 40X.

Concentración espermática, (dilusión de la muestra):

Se plantean tres casos de concentración espermática, Whittemore. C , reporta que en un eyaculado de cerdo normal puede existir una cantidad de espermas igual a 30 a 150 x 109 espermas en un eyaculado que puede variar según la edad, estado, etc de 100 a 500 ml.

Se toma 1 ml de eyaculado y se agrega a 99 ml de  SUERO FISIOLOGICO FORMOLADO, después de esta dilución se toma con una micro pipeta de 0,1 µl (micro litro) y se deposita en la cámara de neubauer después se seleccionan 40 cuadros pequeños o 5 cuadrados grandes y se realiza el respectivo conteo. Dando como resultado los valores expuestos para determinar si el eyaculado esta dentro de los límites normales.

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