Extraccion De Adn De Celulas Epiteliales

Objetivo

En esta práctica realizaremos la extracción del ADN de las células de descamación del epitelio mucoso del interior de la boca, poniendo de manifiesto su estructura fibrilar y el extraordinario grado de arrollamiento, que permite el empaquetamiento en el núcleo celular de las larguísimas cadenas de esta molécula.

Tras la extracción se suspenderá el ADN recuperado en alcohol de 70º para su conservación.

Material necesario

- Agua mineral - Alcohol de 96º muy frío - Cucharillas de plástico

- Palillo o varilla de vidrio - Sal común - Detergente lavavajillas

- Vasos desechables - Tubo de ensayo - Gradilla

- Tubos eppendorf - Alcohol de 70º

Fundamento

El ADN se encuentra en el interior del núcleo de todas las células, disperso y muy replegado, unido a proteínas para formar la cromatina. Por lo tanto, podremos extraerlo a partir de prácticamente cualquier material de origen biológico. Para ello es necesario romper las células para separar el núcleo y romper éste para liberar el ADN, separarlo de las proteínas y precipitarlo para separarlo de la solución acuosa.

El ADN (y también algo de ARN) aparecerá entonces como un agregado de fibras blanquecinas de aspecto mucoso que se adhieren a una varilla de vidrio o a la pipeta. Podemos añadir unas gotas de azul de metileno o verde de metilo al tubo para teñirlo. Por último, se puede situar sobre un porta, teñirlo de la misma manera y observarlo al microscopio. También se puede conservar dejándolo secar sobre papel de filtro o suspendido en alcohol al 50% o 70%.

Procedimiento

Preparar un tubo de ensayo con alcohol etílico de 96 ºpor cada alumno y poner a enfriar lo máximo que sea posible,por ejemplo en baño de agua con hielo,mientras se realizan los pasos siguientes.

Poner un poco de agua en un vaso y enjuagarse la boca enérgicamente durante al menos medio minuto para arrastrar el mayor número posible de células de descamación de la mucosa bucal (antes de hacerlo conviene haber tragado saliva para eliminar la acción de los enzimas contenidos en ella).

Mientras tanto pondremos una pequeña cantidad de agua destilada (o mineral) en el mismo vaso, unos 20ml, y añadimos dos pizcas de sal común y un par de gotas de detergente lavavajillas.

Expulsar el agua en el vaso de precipitados sobre la solución anterior. Dejaremos actuar durante unos 10 minutos, removiendo de vez en cuando suavemente para disolver estos componentes evitando la formación de espuma.

Ponemos un poco de sal común y lavavajillas se remueve suavemente dejando actuar unos diez minutos

A continuación, añadir la solución suavemente al

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