Extracción y cuantificación de ADN

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Extracción y cuantificación de ADN

1. Introducción

En la actualidad, el estudio de la variación genética entre individuos, poblaciones y especies para explicar patrones y procesos ecológico-evolutivos se aborda mediante marcadores moleculares, segmentos de ADN con o sin función conocida que proporcionan información sobre la variación alélica y permiten distinguir individuos (1).

La extracción del ADN es necesaria en multitud de aplicaciones de la biología molecular. Existe un gran número de kits comerciales. Se ha demostrado que la sensibilidad de detección de la PCR es diferente para diferentes kits de ADN (2).

La extracción del ADN de cualquier organismo, a un bajo costo y sin mucho esfuerzo de trabajo en el laboratorio, que se obtenga con una suficiente concentración y pureza en poco tiempo, es importante para muchos investigadores interesados en el estudio o en la comprensión de la clasificación y filogenia de organismos (3).

1. Material y métodos.

1. Materiales

• Cultivo joven de 18 horas
• Tubos ependorf
• Centrífuga
• Micropipetas
• Agua hirviendo (80°C)
• Refrigeradora (4°C)
• NanoDrop

1. Método.

1. Extracción de ADN por el método de shock térmico.[pic 5]

1. Cuantificación de ADN en NanoDrop.

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1. Resultados

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1. Discusión

• La temperatura alta en el procedimiento ayuda a debilitar la célula y así permitir la liberación de ADN. Además de la desnaturalización de esta molécula.(4)
• El enfriamiento repentino genera lisis celular, conserva la molécula y ayuda a su conservación.(5)
• La relación 260/280 es muy estable y se considera un ADN de pureza óptima para un valor ente 1.8-2.0. un ADN de pureza estable de be tener al menos una relación A260/280 >1.6. un valor menor a 1.6 significa una posible contaminación por proteínas y compuestos aromáticos (6).
• A 230 nm se absorben contaminantes como sales catrópicas, fenoles o carbohidratos. En general, se considera que el ADN es puro cuando la ratio se sitúa entre 1.5-2.2. Una ratio menor a 1.5 indicaría la presencia de contaminantes en la muestra (6).
•   Según los resultados, las muestras presentan una relación 269/280 y 260/230 óptima, por lo tanto, es posible trabajar con esta muestra.

1. Conclusiones

• Se extrajo exitosamente el ADN de enterobacterias siguiendo el protocolo estandarizado.
• Se comprendió el fundamento de la técnica de Shock térmico, así como el fundamento del NanoDrop.

1. Referencias

 1.         Patricia L, Velázquez A, Del Consuelo M, Martínez A, Romero AC. Extracción y purificación de ADN [Internet]. [cited 2019 Jul 11]. Available from: www.eoearth.org/view/article/158858.

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