Fabricación de ADN plasmídico para uso clínico indirecto y directo. aplicaciones

Fabricación de ADN plasmídico para uso clínico indirecto y directo. aplicaciones

Los plásmidos son pequeñas moléculas circulares de ADN de doble cadena que contienen información genética cromosómica; por otro lado la célula contiene varias copias de un plásmido. Sin embargo, en los últimos años los plásmidos han cobrado gran relevancia en genética ya que se utilizan para superar deficiencias monogenéticas como la fibrosis quística, la hemofilia o para inducir respuestas inmunitarias frente a infecciones.

En cuanto a los puntos normativos, en la aplicación farmacéutica, los plásmidos protegen al paciente, directa o indirectamente, de cualquier peligro potencial relacionado con la ingestión del material; que se usa en paralelo para modificar genéticamente las células en las que el ADN no se aplica directamente al paciente, sino que se usa para transfectar una célula y de esa manera producir un vector viral o efectivo, aquí el ADN no es el API porque no se transfiere ningún plásmido en sí, al paciente (aplicación indirecta).

Sin embargo, en el nivel de alta calidad (calidad HQ) el ADN plasmídico se utiliza como materia prima en una producción que cumple con las GMP donde el ADN plasmídico se genera a un nivel de alta calidad en una instalación basada en una investigación Cell Bank (RCB), siendo muy efectivo Grade (también llamado tecnología de ADN “superenrollado”) y muy eficaz.

Ya en los pasos del proceso tenemos los siguientes: Piloto de carreras, es el primer paso, para obtener información básica se debe cuidar que todos los elementos utilizados permanezcan accesibles en calidad ideal aún para el nivel de calidad esperado; Banco de células de E. coli, se transforman con el ADN plasmídico que se va a amplificar, son necesarios para el cultivo reproducible a gran escala de la biomasa bacteriana, deben estar completamente caracterizados para tener la calidad suficiente y almacenarse adecuadamente para un fabricación adicional, en cuanto a la Fermentación el banco de células caracterizadas se utiliza para preparar un precultivo para la inoculación del bio reactor, donde la cosecha celular y lisis pueden ser monitoreados y ajustados; la Cosecha celular y lisis es donde la biomasa resultante de la fermentación se separa del líquido de cultivo por lotes o sustratos limitantes que  pueden ser monitoreados y ajustados. Las células suspendidas se destruyen por lisis alcalina. El plásmido resultante que contiene el lisado aclarado se esteriliza por filtración para su posterior procesamiento descendente (DSP); en cuanto a la Cromatografía se realizan para separar las moléculas de plásmido el cual depende del grado de calidad requerido del producto plásmido. La fabricación avanzada es capaz de eliminar solución para su posterior procesamiento o almacenamiento y aplicación. Para un desarrollo eficiente del proceso de purificación, se utiliza un sistema de cromatografía que incluye una bomba formadora de gradiente y detección UV para el muestreo de productos, asegurando condiciones controladas y reproducibles y para la Formulación y relleno el DSP da como resultado ADN de plásmido purificado a granel que se formula en el tampón apropiado.

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