Fotosintesis

Objetivo

Comprobar el fenómeno fotosintético efectuado por cloroplastos aislados por uso de aceptores electrónicos artificiales.

EQUIPO MATERIAL REACTIVOS

Balanza granataria 1 Probeta de 25 ml Solución de sacarosa 0,4 M 500 ml

Baño maría 1 pipeta de 1 ml Solución de cloruro de potasio 0,0084 M, 100 ml

Centrifuga 3 pipetas de 5 ml Solución de 2,6-diclorofenolindofenol (16mg/100 ml), 20 ml.

Licuadora 1 pipeta de 10 ml Solución amortiguadora de fosfatos a pH 6.8,, 1 000 ml.

1 embudo de filtración

2 vaso precipitado de 100 ml

6 tubos de ensaye

Gradilla

Tela de asbesto

Tripie

Mechero

Tubos para centrifuga

1 pipeta Pasteur

Perilla

Hielo

Algodón de vidrio

Hojas de espinacas, 50 gr.

PROCEDIMIENTO

1.- Pesar las hojas de espinaca (8 gr) y licuarlas o molerlas en un mortero con solución ded sacarosa helada.

2.- Filtrar la suspensión pasándola a través de algodón de vidrio, colocado en el embudo de plástico.

3.- Tomar el sobrenadante y centrifugarlo a 600 g por 10 minutos.

4.- Quitar el sobrenadante y lavar el residuo en sacarosa 0,4 M, en esta fracción se encuentran suspendidos los cloroplastos.

5.- suspender los cloroplastos en 10 ml de sacarosa 0,4 M helada.

6.- Dividir la suspensión en dos partes, conservar una en hielo y la otra hervirla y dejar enfriar.

7.- Preparar 6 tubos de ensayo de acuerdo con la siguiente tabla:

TUBOS Solución amortiguadora suspensión de cloroplastos Frio/ Hervida Solución de diclorofenol

A 3.5 ml 1.5 ml Frio

B 3.5 ml 1.5 ml hervida

C 3.5 ml 1.5 ml Frio 0.5 ml

D 3 ml 1.5 ml Hervida 0.5 ml

E 3.5 ml 1.5 ml Frio 0.5 ml

F 3 ml 1.5 ml Hervida 0.5 ml

8.- Colocar los tubos a, b, c y d bajo una luz intensa y los tubos e y f en la oscuridad envueltos en papel carbón, estos dos últimos.

9.- Después de 10 a 15 minutos, observar la coloración de los tubos.

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