Glucan 1,3-beta-glucosidase

Nombre: Glucan 1,3-beta-glucosidase (EXG1)

Nombres alternativos: Exo-1,3-beta-glucanase ó Exo-1,3-beta-glucosidase.

Organismo: Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c)

EC: 3.2.1.58 

    3. Hidrolasa

    3.2 Glicosilasas

    3.2.1 Glicosidasas

    3.2.1.58 Glucan 1,3 beta-glucosidasa

Tamaño: 448 AA

Reacción1: Hidrólisis sucesiva de unidades de beta-D-glucosa a partir de los extremos de (1 -> 3)-beta-D-glucanos, generando  liberación de alfa-glucosa.

[pic 1]

1,3-beta-D-Glucano(n+1) + H2O <=> 1,3-beta-D-Glucano(n) + alfa-D-Glucosa

Función: Los beta-glucanasas participan en el metabolismo de beta-glucano, el principal componente estructural de la pared celular, jugando un rol importante en la expansión de celular durante el crecimiento, fusión célula-célula durante el apareamiento, y en la liberación de esporas durante la esporulación.

Problema: Botrytis cinerea, un hongo patógeno, es la causa primaria de la podredumbre del racimo en uvas. Uvas infectadas con Botrytis son generalmente consideradas como indeseables para la producción de vinos de mesa debido a su impacto negativo en la calidad del vino. Los altos niveles de Botrytis causan aumentos en glucanos, que afecta adversamente al producto acabado ya que y entorpecen su clarificación y filtrado.

Solución: Este problema se soluciona añadiendo enzimas con actividad beta-glucanasa.

Estructura Primaria:  

>sp|P23776|EXG1_YEAST Glucan 1,3-beta-glucosidase I/II OS=Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) GN=EXG1 PE=1 SV=1

MLSLKTLLCTLLTVSSVLATPVPARDPSSIQFVHEENKKRYYDYDHGSLGEPIRGVNIGG

WLLLEPYITPSLFEAFRTNDDNDEGIPVDEYHFCQYLGKDLAKSRLQSHWSTFYQEQDFA

NIASQGFNLVRIPIGYWAFQTLDDDPYVSGLQESYLDQAIGWARNNSLKVWVDLHGAAGS

QNGFDNSGLRDSYKFLEDSNLAVTTNVLNYILKKYSAEEYLDTVIGIELINEPLGPVLDM

DKMKNDYLAPAYEYLRNNIKSDQVIIIHDAFQPYNYWDDFMTENDGYWGVTIDHHHYQVF

ASDQLERSIDEHIKVACEWGTGVLNESHWTVCGEFAAALTDCTKWLNSVGFGARYDGSWV

NGDQTSSYIGSCANNDDIAYWSDERKENTRRYVEAQLDAFEMRGGWIIWCYKTESSLEWD

AQRLMFNGLFPQPLTDRKYPNQCGTISN

• Peso Molecular:  43000 Da (Glicosilada) 2
• Peptido Señal: 1-19 (teórico, no exprerimental)
• Propeptido: 20-40
• Cadena: 408
• Sitio Activo:  232 Donador de protones (E, Acido glutámico)

                       334 Neutrófilo (E, Acido glutámico)

• Glicosilaciones: 165 N, Asparragina

                             325 N, Asparragina

Estructura Secundaria:

[pic 2]

Estructura Terciaria3: Es monómero. La imagen fue obtenida por  difracción de rayos X, con una resolución de  [pic 3]1.75Å-[pic 4]

Dominios conservados:

[pic 5]

Parámetros enzimáticos4} : En este paper generan una mutación puntual afectado a una de las glicosilaciones. Al evaluar los parámetros enzimáticos, se observa que la enzima puede degradar enlaces tanto 1-3 como 1-6. En la Tabla 2 se muestra que a pesar que puede degradar enlaces 1-6, no es tan afín como con los enlaces 1-3 (Km alto). Además se concluyó que la enzima es más eficiente en moléculas pequeñas, como la laminaribiosa.

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