Hemoaglutinacion

Tema: Técnica de Hemoaglutinación.

Objetivo:

Comprobar si está presente o no el virus de New Castle en una población aviar mediante la técnica de hemoaglutinación directa la cual permitirá observar la acción del virus sobre el eritrocito.

Materiales:

-Líquido alantoideo de embriones muertos.

-Placa para ELISA con fondo cóncavo.

-Pipeta multicanal y unicanal.

-Solución de glóbulos rojos al 1%.

-Diluyente PBS.

Procedimiento:

o Utilizando la pipeta colocar 100 ul de PVC en la primera fila de las 4 columnas de los pocillos. En los pocillos restantes colocar 50 ul de PVC.

o En el primer pocillo colocar 25 ul del antígeno (líquido alantoideo), dilución 1/5.

o Luego tomamos 50 ul del primer pocillo y lo colocamos en el segundo pocillo obteniendo una dilución 1/10 y así sucesivamente obteniendo diluciones 1/20, 1/40, 1/80, 1/160, 1/320.

o Luego colocar 50 ul de glóbulos rojos en cada pocillo de las 4 columnas.

o Incubar a T= 30°.

También se puede hacer la prueba de inhibición de la hemoaglutinación para lo cual se requiere de un antígeno con 10 unidades hemoaglutinantes. Esta prueba tiene por objeto revelar el lugar de acción del antígeno y el anticuerpo.

o Se hace la titulación del antígeno para lo cual se añade 100 ul de PVS en la primera fila de las 4 columnas de los pocillos. En los pocillos restantes se coloca 50 ul de PVC.

o En el primer pocillo se coloca 25 ul del suero, dilución 1/5.

o Tomamos 50 ul del primer pocillo y lo transferimos al segundo pocillo y hacemos la dilución 1/10 y así sucesivamente hasta la dilución 1/320.

o Se añade el antígeno de 10 unidades hemoaglutinantes en cada pocillo.

o Se encuba por 30 min a T° ambiente

o Coloco 50 ul de glóbulos rojos.

Gráfico:

Resultados:

o En la hemaglutinación los resultados a observarse pueden ser :

Positivos: presencia de grumos en cada pocillo (hemoaglutinación)

Negativos: Formación de un botón en el centro del pocillo.

Reacción + hay hemoaglutinación

Reacción - presencia de botón

1° antígeno = 1/160 unidades hemoaglutinantes.

2° antígeno= 1/5 unidades hemoaglutinantes.

3° antígeno= 1/160 unidades hemoaglutinantes

o En la inhibición de la hemoaglutinación si hay anticuerpos en el suero se bloquea la hemoaglutinina, no se aglutinan los glóbulos rojos y se forma un botón en el centro del pocillo.

Para esta técnica se utilizaría el 1° y 3° antígeno de 1/160 unidades hemoaglutinantes.

Reacción + presencia de botón en el centro.

Reacción - hay hemoaglutinación

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