Hidroxilammina

Hidroxilamina como agente mutagénico para NeurosporaCrassa

Resumen

La mutagenicidad de Hidroxilamina (HA) ha sido probada en 8 diferentes mutantes de Neurosporacrassa, auxótrofas a Adenina (ad-3B):

4 mutantes de este set de prueba se revirtieron después del tratamiento con ácido nitroso y metanosulfonato de etilo, indicando que estos se revirtieron por una substitución de un par de bases;2 mutantes se revirtieron solo después del tratamiento con ICR-170, indicando que estos se revirtieron por una inserción o deleción de un par de bases; y 2 mutantes se revirtieron solo espontáneamente.

La HA indujo reversiones en 3 de los 4 mutantes, los cuales se revirtieron por la sustitución de un par de bases y en ningún otro. La especificidad de acción de HA en los mutantes en el presente set de prueba es consistente con la hipótesis de que la clase predominante de las alteraciones genéticas inducidas por HA en Neurospora crassa es la transición de un par de bases, de Guanina-Citosina a Adenina—Timina. Además se encontró que la frecuencia de reversión después del tratamiento con HA aumentó en proporción al cuadrado del tiempo del tratamiento.

Introducción

HA induce una sustitución de un par de bases en fagos y el tipo de alteración genética es preferentemente de G-C a A-T. La reacción química entre HA y DNA ha sido analizada por FREESE et al, quien encontró que HA reacciona solo con citosina y HMC. El tratamiento de RNA con HA altera ambos: Uracilo y Citosina; a pH=6.1 la reacción es mucho más rápida con Citosina que con Uracilo, mientras más alto el pH, la relación es a la inversa. HA ha mostrado inducir daño cromosomal en células de mamíferos, pero ningún ensayo previo ha sido exitoso en identificar las alteraciones genéticas inducidas por HA en eucariotes a nivel molecular. La caracterización de mutaciones en Neurospora inducidas por HA es particularmente importante porque podría ser tan específico en eucariotes como en fagos, produciendo mutaciones por sustitución de par de bases, resultando en transiciones de GC a AT. Tal especificidad podría hacer a HA especialmente idónea para la caracterización de alteraciones genéticas inducidas por mutágenos menos específicos a nivel molecular por el significado de las pruebas para reversibilidad específica. La prueba para la inducción de reversiones en mutantes resultantes de alteraciones genéticas conocidas es un método más simple para caracterizar los efectos genéticos de mutágenos que ninguna técnica conocida que se aplique después de la mutación en Neurospora. La caracterización está limitada por la colección de alteraciones genéticas en el mutante que comprende este set de prueba. Sin embargo, seleccionando el revertimiento de mutantes por las alteraciones genéticas más comunes es posible obtener una aproximación del espectro de alteraciones genéticas producidas por un mutágeno

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