IDENTIFICACION DE AZUCARES. Palabras clave: azúcar reductor, polisacáridos, pigmentación

IDENTIFICACION DE AZUCARES

Dalina lizbeth castellanos diaz; yesenia guadalupe camas perez; pablo fernando diaz suares; jose rene garcia avendaño; cinhia victoria hernandez jimenez

Resumen. Se tomaron muestras de los diferentes tipos de azucares como la celulosa, fructosa, sacarosa, maltosa, lactosa y el almidón en 6 tubos de ensaye y a cada una de las muestras con el azúcar se colocaron gotas de los diferentes reactivos como el reactivo de fehling, tollens, benedict, molish, yodo lugol. En el que teníamos que observar los cambios de coloración para identificar los azucares reductores y los no reductores, posteriormente se tomó la muestra de un azúcar biológico y se añadieron las gotas de los diferentes reactivos para identificar los azucares reductores y no reductores.

Palabras clave: azúcar reductor, polisacáridos, pigmentación.

Introducción. Los carbohidratos no solo son una fuente importante de producción rápida de energía en las células, sino que también son las estructuras fundamentales de las células y componentes de numerosas rutas metabólicas. En la actualidad se reconoce que los polímeros de azúcares unidos a proteínas y a lípidos son un sistema de codificación de alta densidad. Los seres vivos aprovechan la vasta diversidad estructural de estas moléculas para producir la capacidad informática necesaria para los procesos vitales. Se forman durante la fotosíntesis, un proceso bioquímico en el que se captura la energía luminosa y se utiliza para impulsar la biosíntesis de moléculas orgánicas con energía abundante a partir de las moléculas con poca energía: CO2 y H20. La mayoría de los carbohidratos contienen carbono, hidrógeno y oxígeno en una proporción (CH20)n, de aquí su nombre. En años recientes se ha hecho cada vez más evidente que los carbohidratos proporcionan a los seres vivos capacidades informativas enormes. Las investigaciones de los procesos biológicos, como la transducción de señales, las interacciones célula-célula y la endocitosis, han descubierto que en general implican la unión de glucoconjugados, como las glucoproteínas y los glucolípidos, o de carbohidratos libres con receptores complementarios.

Materiales y Métodos.

Desvitrificación. Se evaluó la concentración de sales MS al 0, 25, 50, 75 y 100 %.

Aclimatación. Plántulas in vitro, se  enjuagaron en agua destilada con Captan®-Agrimicyn® (2:1), se colocaron en macetas con peat moss, se cubrieron con bolsas de polietileno y se mantuvieron en cámara bioclimática.

Micorrización. Consistió en 4 tratamientos: 1) sin HMA y sin fósforo, 2) sin HMA pero suplementado con 0.5 g de KH2PO4/kg de sustrato, 3) con 5 g de HMA y sin fósforo y 4) con 5 g de  HMA y con 0.5 g de KH2PO4/kg de sustrato, cada uno con 5 repeticiones.

Extracción de carbohidratos: Las muestras fueron trituradas con agua ultrapura y se colocaron en baño María a 80°C durante 40 min, el sobrenadante se separó por centrifugación a 10,000 rpm durante 20 minutos. Se ajustó a pH 7 y se filtraron empleando membrana de 45 µm. 10 µL de muestra se procesaron por HPLC.

Extracción de proteínas: Las muestras se trituraron en presencia de nitrógeno liquido, se disolvieron en buffer de extracción (pH 5.5, 50 mM de acetato de sodio, 1 mM de EDTA, 1 mM mercaptoetanol, 1% (w/v) de PVP-40 y 0.1% (v/v) de inhibidor de proteasas) y se conservaron durante 2 horas en agitación, se centrifugó a 4 °C y 10,000 RPM durante 30 minutos. El sobrenadante se saturó al 20% con (NH4)2SO4 y permaneció en reposo durante 2 horas, se centrifugó y al sobrenadante se le adiciono (NH4)2SO4 hasta una saturación de 70% y se dejo reposar durante 6 horas, se centrifugó, el precipitado obtenido se dializó durante 6 horas y finalmente se liofilizó.

Actividad enzimática. La mezcla de reacción consistió en 10 μL de extracto enzimático crudo y 10 μL del sustrato a evaluar (sacarosa, 1-kestosa o nystosa 100 mM), incubados en buffer de acetato con pH 5.5, a 30 º C por 24 y 48 hrs. La reacción se detuvo por calentamiento a 85 º C durante 5 min.

Resultados y discusión. Durante la multiplicación de brotes con BA se obtuvo un 88% de vitrificación, mientras que al reducir la concentración de sales MS y suprimir la adición de BA  al medio de cultivo se observó una reducción en la vitrificación y aumentó el número de estomas tanto en el haz como en el envés de las hojas.

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