Inmunodetención

Inmunodetención:

Consiste en detectar antígenos utilizando anticuerpos que reconozcan específicamente. La fijación es esencial para observar el tejido de la manera más parecida a la realidad, evitando su descomposición o alteración.

                                                                Inmovilizar el antígeno sin modificarlo[pic 1]

El proceso de fijación tiene que                                        Mantener la estructura celular[pic 2][pic 3]

                                                                Permitir un buen acceso al anticuerpo

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¿Que es un marcador?                        ¿Dónde  encontramos marcadores en las células?

Marcadores                                        Células/ antígenos detectados

CD1a                                                Células de Langerhans[pic 5]

CD4                                                Linfocitos T de auxilio

CD8                                                Linfocitos T citotóxico

CD30                                                Células de reed – Stember

CD45                                                Leucocitos

CD68                                                Macrófagos

CEA                                                Antígeno carcino Embrionario

Marcadores celulares:         Son moléculas funcionales presentes en las células, que permiten su identificación, importante enfermedad ya que se podrá reconocer moleculas enfermas.

¿Dónde encontramos marcadores en la células? Hay marcadores celulares en la membrana plasmática,

intracelular, citoplasma, esta pueden ser enzima, proteínas, moléculas de superficie, moléculas receptoras, los iones, también funcionan como marcadores celulares, se pueden ocupar moléculas

• Todas pueden ser identificadas por reactivos que marcan a las proteínas ayudando a medir la estructura de la célula y como funciona célula y en que grado esta siendo funcional.

• Los linfocitos y otros leucocitos expresan un gran número de “moléculas de superficie”, que pueden ser aprovechados como marcadores para distinguir distintas células.

• La mayoría de estos marcadores celulares pueden ser detectados mediante anticuerpos monoclonales específicos.

Los marcadores de superficie suelen ser moléculas funcionales que reflejan el estado de diferenciación y de activación celular.  Se llaman marcadores porque van ayudar a identificar a diferentes células en el organismo  y están en las superficies.

Nomenclatura CD (Cluster designation Antígenos de diferenciación):

Ejemplo: Los antígenos específicos de los linfocitos B son CD19, CD20 y CD22.

[pic 6][pic 7]

Ejemplo de marcadores celulares:  moléculas extracelular que son liberadas por la célula, sirve esto como marca que nos habla de la función de la célula, quizás sea un mensaje.

¿Cómo distingue los marcadores celulares? Distingue lo propio con lo extraño. Las proteínas que funcionan como marcadores celulares van atener características que la van a ser identificadas diferentes a otras, asi se reconoce la invasión lo extraño.

Ejemplo el rechazo de trasplante esto tiene que ver con que las células identifican como extraño el órgano trasplantado,

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En que consiste la inmunodetección

Anticuerpo:                

• Tambien llamado “Inmunoglobulina”, son glicoproteinas en forma de “Y”
• Producida por linfocitos B (Secrección regulada)
• 2 cadenas polipeptidica: ligera y pesada.
• Se unene mediante puente disulfuro
• Cada cadena tiene regiones constantes y terminal. Estas ultimas determinan la clase del Ig: IgA, IgG, IgD.
• La región del anticuerpo que interraciona con el antigeno se denomina paratopo.

Antigeno:

• Sustancia extraña/ajena al organismo.
• También se le denomina asi a la sustancia a ser analizada en una muestra biologica y que se quiere detectar.
• Posee una region que interacciona con el anticuerpo el epitopo.

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Especificidad: Capacidad de los anticuerpos para discriminar antigenos.

Afinidad: Instensidad de la union entre anticuerpo y antigeno.

Reaccion cruzada: interracion anticuerpo con antigeno que deberia reconocer.

Sensibilidad: Cantidad minimo de antigeno que se puede detectar con una tecnica determinada.

Tipo de anticuerpos:

Anticuerpo policlonales:

• Reconocen varios epitopos de un mismo antígeno.

• Lo ocupan en ratones
• Los anticuerpos policlonales se producen inyectando antigeno en un animal, se vuelve a inyectar en 10 dias se realiza otra inmunización con el mismo antígeno, para producir anticuerpos mas potente contra el antígeno. Los anticuerpos policlonales se pueden obtener de la sangre, si se separa suero, se pueden ver los anticuerpos policlonales, osea estarán anticuerpo unidos a diferentes epitopos de antígeno.

Ventajas

• mayor espectro de reactividad, intensidad de señal elevada, más barato y menos tiempo.

Desventajas:

• Elevada posibilidad de reactividad cruzada debido al reconocimiento de múltiples epítopos (los anticuerpos purificados por afinidad muestran una reactividad cruzada mínima).

Anticuerpo monoclonales:

• Reconocen solo un epitopo.
• Lo ocupan en conejos, ovejas.
• Para llegar al monoclonal se necesita el bazo del animal
• Se producen en animales vivos, los anticuerpos monoclonales se producen en modelos ex vivo utilizando cultivo celular. El proceso comienza con una inyección del antígeno deseado en un animal. Una vez que el animal desarrolla una respuesta inmune, los linfocitos B se aíslan del bazo del animal y se fusionan con una línea celular de mieloma, creando hibridomas inmortalizados de células B y mielomas. Los hibridomas, que son capaces de crecer continuamente en cultivo mientras producen anticuerpos, se seleccionan para el anticuerpo monoclonal deseado.

Ventaja

• Gran especificidad, producen menos fondo.
• Posibilidad de producir grandes cantidades de anticuerpos idénticos (una ventaja para la fabricación de diagnóstico y el desarrollo terapéutico de fármacos).

Desventaja

• Técnica puede alterar epitopo y enmascarlo. Son mas caros y la concentración de trabajo suele ser mayor
• Más susceptible a los cambios de unión cuando está unido a fluorocromo.
• Más caros de producir.

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Preguntas de tipo de anticuerpos:

1. Con que tipo de anticuerpos se pueden realizar técnicas de inmunofluorecencia?

Con anticuerpos policlonales (reconocen varios epitopos) y anticuerpo monoclonales (reconocen un epitopo).

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