Inoculación de una muestra de agua sucia en un medio de cultivo general.

Centro de Bachillerato Tecnológico  industrial de servicios 144

Inoculación de una muestra de agua sucia en un medio de cultivo general

Microbiología

Cañaberal López Sandra Verónica

De la Cruz Herrera Leslie Grisel

De los Santos Velázquez Sheyla Julissa

Herrera Aguilar Sujeyli Yusset

León Ruiz Alvaro

León Ruiz Andrea Lissette

Ordoñez Ocaña Margarita

Zenteno Rosales Jennifer Adriana

Marco teórico

Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio.

El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno adecuado, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante.

Los medios de cultivo preparados pueden ser clasificados por su aspecto en:

• Líquidos
• Semisólidos
• Sólidos.

Y por su uso en:

• Medios de cultivos básicos
• Medios de cultivos especiales como: mejorados, selectivos, diferenciales, de transporte.

La elección del medio se basa en el propósito de estudio. El material que se inocula en el medio se denomina inoculo.

Es muy frecuente que en un material dado habiten varios tipos de organismos por lo que es necesario para su estudio, separarlos y cultivarlos. A esto se le llama aislamiento.

Aunque antiguamente el procedimiento se hacía en medios de cultivo líquidos, haciendo diluciones exhaustivas, actualmente se combina la práctica de diluciones con la inoculación en medios sólidos, los que nos da la ventaja de permitir la cuantificación del contenido microbiano de las muestras en estudio, y permite el estudio de varios tipos de organismos presentes en una muestra que pueden formar colonias de características distintiva.

El aislamiento de cultivos microbianos puede realizarse por métodos de dilución, en medios sólidos por vertido en placa, dispersión en la superficie o estría cruzada o en medios líquidos.

Para favorecer este aislamiento en cultivos de baja densidad, se aplican métodos  especiales, en los que se utilizan medios que contienen nutrientes específicos y/o condiciones fisicoquímicas para favorecer el crecimiento del microorganismo de interés.

Objetivo

• Identificar morfología colonial procedente de un inoculo de agua sucia en un medio de cultivo general.

Metodología

Microbiología general

• 1. El docente aplico los principios generales para el trabajo, para la realización de las técnicas de preparación y esterilización de los medios de cultivo, así como su manejo en condiciones asépticas.
• 2. Desinfectamos el área de trabajo con solución de benzal a fin de tener nuestro espacio limpio, por consiguiente, la forramos con papel aluminio.
• 3. Pedimos el material correspondiente y enseguida encendimos los mecheros para comenzar.

Preparación de medios de cultivo sólidos

• 1. Leer la las instrucciones del fabricante correspondiente para cada medio de cultivo y pesar la cantidad necesaria según el volumen requerido en un matraz para el medio de cultivo, en este caso un volumen de 40ml.
• 2. Disolver el medio en el agua destilada
• 3. Agitar y calentar a ebullición para disolver el Agar. Especialmente en este paso debe de haber mucho cuidado puesto que el precipitado se calienta en exceso y el producto tiende a hervir y proyectarse, lo cual podría producir serias quemaduras.
• 4. El Agar ya disuelto hizo transparente al medio que originalmente se encontraba turbio. Para una mayor y mejor solubilidad puede utilizarse un baño maría, sin embargo, en nuestro caso no fue utilizado.

Vaciado de medio sólido en caja Petri

• 1. Mantener el mechero encendido y trabajar cerca del área estéril al momento del vaciado en las cajas Petri.
• 2. Levantar la tapadera con la mano izquierda sin soltarla y sin retirar demasiado de la base de la misma caja, mientras que con la mano derecha se toma el matraz que contiene el medio de cultivo y posteriormente realizar el vaciado de aproximadamente 15 ml a 20 ml de Agar por cada caja procurando que no se formen burbujas, y proceder a tapar la caja inmediatamente.
• 3. En caso de que algunas cajas formen burbujas, flamear la base de la caja Petri donde se encuentra el medio de cultivo, de una manera rápida y después tapar la caja.
• 4. Esperar a que el medio solidifique. Si ese mismo día no se va a utilizar, envolver las cajas con papel krafty  y sujetar con cinta, anotar los datos correspondientes del equipo y proceder a colocarlo en el refrigerador de manera invertida para evitar que el vapor condensado caiga sobre el medio de cultivo y lo contamine.

Aislamiento por el medio de estría cruzada

• 1. Para comenzar con el método esterilizar el asa bacteriológica por incineración.
• 2. Enfriar el asa esperando unos minutos pero sin agitarla.
• 3. Tomar una azada de la muestra (agua sucia) y colocarla en el borde de la placa Petri que contiene el medio, haciendo estrías continuas hacia el centro de la caja de acuerdo a la indicación del docente.
• 4. Esterilizar el asa nuevamente y enfriar.
• 5. Hacer una segunda serie de estrías tocando la porción final de la anterior.
• 6. Esterilizar el asa nuevamente  y enfriar
• 7. Realizar una tercera serie de estrías tocando la porción final de la segunda.
• 8. Tapar la caja y esterilizar por último el asa.
• 9. Para el resto de las cajas repetir el mismo procedimiento.
• 10. Invertir las placas e incubar a 35± 2ºC durante 3 días.
• 11. Al tercer día regresar a examinar mediante un cuenta colonias el crecimiento de el microorganismo sembrado.

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CONCLUSIÓN

Llegamos a la conclusión de que uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo.

Cuestionario

¿Qué finalidad tiene utilizar medios de cultivo solidos?

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