LABORATORIO DE BIOQUÍMICA INFORME No. 1: ESPECTROFOTOMETRÍA Y CURVA DE CALIBRACIÓN

UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA

FACULTAD DE CIENCIAS FARMACEUTICAS Y ALIMENTARIAS

QUIMICA FARMACEUTICA

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA

INFORME No. 1: ESPECTROFOTOMETRÍA Y CURVA DE CALIBRACIÓN

POR:

SANDRA PATRICIA RIOS SALAZAR C.C 43256019

YULIANA ARAGON GRISALES C.C 1128478779

PROFESOR: ARLEY CAMILO PATIÑO LLANO

MEDELLÍN

03 DE FEBRERO DE 2016

OBJETIVO:

Aprender a usar y manejar el espectrofotómetro, para leer la absorbancia del azul de metileno y poder llegar a obtener la concentración, que será útil para luego realizar la curva de calibración con nuestros datos y poder ubicar nuestra muestra problema.

1. MARCO TEORICO

Introducción

Desde hace muchos años se ha usado el color como ayuda para reconocer las sustancias químicas; al reemplazar el ojo humano por otros detectores de radiación se puede estudiar la absorción de sustancias, no solamente en la zona del espectro visible, sino también en ultravioleta e infrarrojo. Se denomina espectrofotometría a la medición de la cantidad de energía radiante que absorbe un sistema químico en función de la longitud de onda de la radiación, y a las mediciones a una determinada longitud de onda. La teoría ondulatoria de la luz propone la idea de que un haz de luz es un flujo de cuantos de energía llamados fotones; la luz de una cierta longitud de onda está asociada con los fotones, cada uno de los cuales posee una cantidad definida de energía.

Absortividad y Absortividad Molar

La absorbancia es directamente proporcional a la longitud del camino b a través de la solución y la concentración c de la especie absorbente. Estas relaciones se dan como:

A = a·b·c

Siendo a una constante de proporcionalidad llamada absortividad. La magnitud de a dependerá delas unidades empleadas para b y c. A menudo b es dada en términos de cm y c en gramos por litro, entonces la absortividad tiene unidades de  l·g–1·cm–1.

Cuando la concentración se expresa en moles por litro y la longitud de la celda en centímetros, la absortividad se llama absortividad molar, se designa como ε y tiene unidades de l·mol–1·cm–1, entonces la absorbancia es:

A = ε·b·c

Curva de Calibración

Denominamos espectro de una sustancia a la representación de absorbancia (A) en función de longitud de onda (λ), este gráfico presenta ondulaciones con máximos y mínimos. Para hacer las determinaciones cuantitativas se elige, en general, la longitud de onda correspondiente a un máximo, pues el error de medición es mínimo y la sensibilidad máxima. Para verificar el cumplimiento de la ley de Beer, se debe realizar la curva de calibración; absorbancia (A) en función de concentración (c), para lo cual se preparan soluciones de la sustancia de concentraciones conocidas y se mide la absorbancia a la longitud de onda elegida.

[pic 1]

Si es válida la ley de Beer, para esa sustancia a esas concentraciones, la relación debe ser una recta, que pase por el origen de los ejes cartesianos; a menudo se observan desviaciones debidas a diversos factores.

2. MATERIALES

Espectrofotómetro, celdas para el espectrofotómetro, tubos de ensayo, gradilla, pipeta volumetrica, beaker.

3. METODOLOGIA

La metodología  empleada durante esta práctica de laboratorio para hallar la concentración de la muestra problema fue la de a partir de un volumen fijo de una solución de azul de metileno cuya concentración era conocida,  realiza una serie de diluciones sucesivas hasta llegar a siete tubos de ensayo en donde las concentraciones de cada tubo iban disminuyéndose a la mitad con cada dilución efectiva; para luego de calibrar el espectrofotómetro con la muestra en blanco efectuar la medición de la absorbancia de cada una de las siete soluciones obtenidas y a partir de estos datos obtener una curva de calibración, luego de esto la ecuación de la recta que se acomoda a estos datos y de ahí con la absorbancia obtenida de la muestra problema despejar el valor de la respectiva concentración por reemplazo en la ecuación.

4. RESULTADOS

Después de realizar la sección experimental se obtuvieron los siguientes resultados experimentales:

Con estos se realizó el siguiente gráfico:

[pic 2]

Luego, la absorbancia obtenida para la muestra problema de solución de azul de metileno fue de 0,305; por lo que la gráfica anterior nos permite calcular  la concentración de dicha solución, así:

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