La espectrofotometría es la medición de la cantidad de energía radiante que absorbe o transmite un sistema químico en función de la longitud de onda; es el método de análisis óptico más usado en las investigaciones químicas y bioquímicas.

Resumen

La espectrofotometría es la medición de la cantidad de energía radiante que absorbe o transmite un sistema químico en función de la longitud de onda; es el método de análisis óptico más usado en las investigaciones químicas y bioquímicas.

El espectrofotómetro es un instrumento que permite comparar la radiación de absorbancia o transmitancia por una solución que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia.

• Reconocer el adecuado funcionamiento del espectrofotómetro
• Analizar los datos obtenidos en las pruebas de precisión y exactitud.
• Determinar la concentración de las diferentes sustancias de acuerdo con su coloración y con la ayuda del espectrofotómetro

Curva con el reactivo de Bradford.

1. A partir de la solución stock (albumina 1mg/ml) preparar 1ml de cada patrón de la curva (tabla 2) en tubos de ensayo (marque adecuadamente cada tubo).
2. El profesor explicara el manejo del espectrofotómetro. Una vez comprenda el uso, programar los parámetros para elaborar la curva de calibrado.
3. Utilice como blanco agua destilada.
4. Prepare 4ml de solución patrón-reactivo de Bradford en relación 1:50
5.  Espere que transcurran 5min y haga la lectura de la absorbancia a 595 nm por triplicado (en caso de equipos con filtro utilizar 600 nm). Para ellos coloque 1ml de la mezcla patrón-reactivo en una celda e introdúzcala en el equipo. Siga las indicaciones del equipo.
6. Repita los pasos 1y 2 secuencialmente, para que todos los patrones permanezcan el mismo tiempo en reacción con el colorante.
7. El profesor proporciona una muestra problema.
8. Haga la lectura de la muestra problema por triplicado, reparando la muestra igual que los patrones. El equipo le indicara la concentración de la muestra problema.
9. Para confirmar el proceso el profesor dará las instrucciones para que se construya la curva de calibración , graficando absorbancia vs concentración de los patrones y a partir de la ecuación calcular la concentración de la muestra problema.

En conclusión la espectrofotometría es el método de análisis óptico mas usado en las investigaciones químicas y biológicas para hallar en que concentraciones se encuentra algún tipo especifico de una solución, También sirvió para saber los datos que nos arroja.

Se pudo comprender que La absorbancia es la capacidad que tiene algunos compuestos para absorber la radiación electromagnética, pudimos observar como dependiendo  de la concentración y la longitud puede alcanzar un punto máximo de absorción.

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