La espectrofotometría es la medición de la cantidad de energía radiante que absorbe o transmite un sistema químico en función de la longitud de onda

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Índice

Introducción …………………………………………………………………………………. Pág. 2

Objetivo del práctico ……………………………………………………………………. Pág. 3

Materiales…………………………………………………………………………………….. Pág. 4

Método experimental…………………………………………………………………… Pág. 5

Calculo ………………………………………………………………………………………… Pág. 6

Resultado ……………………………………………………………………………………. Pág. 7

Discusión…………………………………………………………………………………….. Pág. 8

Conclusión ………………………………………………………………………………….. Pág. 9

Cuestionario……………………………………………………………………………….. Pág.10

Bibliografía…………………………………………………………………………………. Pág. 11

Anexos ………………………………………………………………………………………. Pág. 12

Introducción

La espectrofotometría es la medición de la cantidad de energía radiante que absorbe o transmite un sistema químico en función de la longitud de onda; es el método de análisis óptico más usado en las investigaciones químicas y bioquímicas. El espectrofotómetro es un instrumento que permite comparar la radiación absorbida o transmitida por una solución que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia.

En este práctico se presenta la cuantificación por espectrofotometría el cual tiene como objetivo obtener la absorbancia de las mezclas con albumina para poder construir una curva de calibración, indicar la ecuación de la recta obtenida y la concentración de proteínas de la muestra problema.

Objetivos del Prácticos

Los objetivo del práctico es obtener la absorbancia de las mezclas con albumina para ello se tiene que medir en el espectrofotómetro que va a tener una unidad de medida de 595nm. Con los resultados  se va a construir una curva de calibración para poder obtener mediante esto una ecuación que nos sirva para poder sacar la concentración de proteína de la muestra de leche (muestra problema). A la cual primero se tendrá que también medir la absorbancia. Y luego poder analizar los resultados obtenidos.

Materiales

Materiales/equipo

• Tubos de ensayo
• Vortex
• Gradilla para tubo de ensayo
• Espectrofotómetro
• Cubeta 1 cm
• Micro pipeta de 20-200 µl
• Micro pipeta de 100-1000 µl

Reactivos

• Estándar de BSA (Albumina de suero de bovino) 100 mg/ml
• Agua destilada
• Solución biuret

Muestra Biológica

• Extracto proteínico: Leche (muestra problema)

Método experimental

1. Construcción de la curva de calibración

1. Se enumera 5 tubos de ensayo del 1 al 5, para luego agregarle una cierta cantidad de agua destilada con albumina para que cada tubo de ensayo tenga diferentes concentraciones aun que el tubo 5 solo va a tener agua destilada

1. Luego de tener eso los tubos de ensayo con la albumina y el agua se le agrega a cada tubo  100 µl de  solución biuret.
2. A continuación se tiene que mezclar cada tubo con el vortex y esperar aprox. 5 min.
3. Luego transcurrido el tiempo se lleva los tubos de ensayo al espectrofotómetro para poder calcular la absorbancia. Primero se tiene que echar  la mezcla del tubo de ensayo 5 en la cubeta y luego colocarla en el espectrofotómetro eso es para poder calibrarla; después se tiene que ir ingresando las mezclas desde el tubo 4 al tubo 1.
4. Después de haber obtenido todas las absorbancia se tiene que poner la mezcla problema para poder medirle la absorbancia.

La leche (muestra problema) se preparo agregándole en un tubo de ensayo 100 µl de leche con 3000 µl de agua destilada y además los 100 µl de biuret para luego poder mezclarla con el vortex y esperar 5 min.

1. Luego con los datos obtenidos se tiene que  traspasar a una planilla Excel, para poder obtener una ecuación para poder sacar la concentración de la solución problema.

Cálculos

• Concentración de proteína de la leche (muestra Problema)

   Y = 0,002x + 0,002

y – 0,002/0,002 = x

0,486 – 0,002/0,002 = x

242 mg/ml = x

• Coeficiente de extinción molar

A= log I0/I= ε × C × l[pic 3]

A = ε × C × l

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