Las plantas generalmente se encuentran contaminados por un elevado número de microorganismos

Índice

Introducción……………………………………………………………………………..3

Procedimiento…………………….……………………………………………………4

Diagrama de flujo………………………………………………………………………….5

Conclusión………………………………………………………………………………….6

Bibliografía…………………………………………………………………………………7

Introducción

Las plantas generalmente se encuentran contaminados por un elevado número de microorganismos que no son patógenos en condiciones normales, pero las condiciones del cultivo in vitro son ideales para la proliferación y crecimiento de microorganismos contaminantes, de ahí la importancia de la correcta desinfección del explante. A continuación se presenta el procedimiento a seguir para una correcta desinfección.

Procedimiento

Al iniciar el trabajo se debe desinfectar la mesa y las paredes donde se realizaran las labores, esto se realizar con etanol al 70 %.
Es necesario que las manos y los antebrazos del cultivador sean desinfectados con alcohol al 70 %.
Se recomienda usar mascaras y eventualmente gorros estériles para mejorar la esterilización del ambiente. Todos los instrumentos metálicos deben flamearse con alcohol al 95 %, así como todos los instrumentos de vidrio que se usan deben ser estériles. Los cortes de los explantes y la transferencia al medio de cultivo, deben realizarse lo más cerca posible al mechero de alcohol.
Así mismo cada especie reacciona en forma diferente al desinfectante, depende también de las condiciones que se desarrolla la planta, época de siembra y tipo de tejidos, entre los productos más usados están:
El hipoclorito de sodio (NaClO) del 1 % al 3% o de uso domestico y el hipoclorito de calcio Ca(ClO)2 del 6 al 12% y el cloruro de mercurio HgCl2 del 0.1% al 1.5%, este último es toxico y poco removible del explante, esto debe ir combinado con el uso del alcohol al 70%. En ocasiones se puede adicionar un elemento tenso activo como el Tween-20 o detergente activo en pequeñas cantidades del 0:01 al 0.1%, especialmente si se usa luego de la desinfección con alcohol.

1. En tres vasos de precipitado previamente esterilizados se preparan diferentes soluciones; la primera de cloro y agua destilada, 10ml y 90ml respectivamente, la segunda 50ml y 50 ml de alcohol y agua destilada y en el tercero se coloca solo agua destilada para el enjuague.
2. Ubicar la planta que será la donadora del explante. Con pinzas y un bisturí tomar el explante de la parte más joven.
3. Se coloca en la primera solución por 8 minutos.
4. Posteriormente con pinzas estériles se pasa a la segunda solución y se deja ahí otros 8 minutos,
5. Por último con las pinzas de nuevo estériles se pasa al último vaso se deja a modo de enjuague por 5 minutos y ya está listo para ser cultivado.

Diagrama de flujo

Preparar cloro en un vaso: agregar 90ml de agua destilada y 10ml de cloro y sumergir el explante durante 8 min.

[pic 1]

Preparar alcohol: vertimos 50ml de alcohol y 50ml de agua destilada, sumergir el explante 8min.[pic 2]

Por último dejamos el explante en agua destilada para enjuagarlo y permanecerá hasta su inoculación.

Conclusión

Si queremos buenos resultados de nuestro cultivo tenemos que hacer una buena desinfección ya que como esta evita la presencia de microorganismos patógenos, el cultivo no tiene que competir con estos por los nutrientes.

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