Microscopia De Luz Y Electronica

I) TITULO : MICROSCOPIA DE LUZ Y ELECTRONICA

II) OBJETIVO:

• Explicar los fundamentos de la microscopía de la luz y microscopía electrónica

• Manejar adecuadamente el microscopio de luz.

• Calcular las resoluciones de las lentes de luz y microscopía electrónica.

• Tipos de microscopía electrónica:TEM,SEM,STEM.

III) FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA:

A. Microscopía de luz.

-E s la técnica de observación usada en el laboratorio Biología celular y molecular de la UNT. Se basa en el empleo del microscopio de luz (ML) que amplifica la imagen de un objeto mediante un sistema de lentes aprovechando la naturaleza corpuscular de la luz visible (0,4 um a 0.75 um).El ML puede ser simple(lupa) o compuesto (microscopio convencional, microscopio de luz ultravioleta ,microscopio stereoscopio ,microscopio polarizador, etc). El ML compuesto usa dos lentes : lente objetivo con una pequeña distancia focal que le permite generar una imagen real y invertida y una lente ocular. Toda lente presenta dos características ópticas que el estudiante debe diferenciar resolución y apertura numérica .

• Resolución: Es la capacidad de la lente de discriminar dos puntos cercanos como diferentes a resolución de una lente (r)=0.61x longitud de onda/N.A(apertura numérica).

• Apertura Numérica: Es una medida que indica la capacidad del objetivo de poder captar los rayos refractados por las estructuras finas de las cuales está constituido el objeto que se observa. Esta capacidad se traduce en el poder 5del microscopio de formar imágenes que muestren al observador una serie de detalles del objeto que se está examinando. Cuanto mayor sea la apertura numérica de un objetivo, éste tendrá una mayor capacidad de mostrar detalles finos en la imagen que forma.La apertura numérica de un objetivo se calcula empleando la formula matemática siguiente:

NA = n x sen α

Donde n representa el índice de refracción de la interfase que separa cubreobjeto de la muestra examinada y la lente frontal del objetivo y α es la mitad del ángulo de apertura.La apertura numérica de un objetivo guarda una relación directamente proporcional con el aumento propio del objetivo y también con la capacidad que tiene de mostrar mayores detalles. Por ejemplo en la relación de objetivos que se muestran se puede comprobar lo afirmado referente al aumento del microscopio:

TIPO DE OBJETIVO RESOLUCIÓN(r) AUMENTO DEL OBJETIVO APERTURA NUMERICA

Panorámico 3360 nm 4X 0.10

De menor aumento 1464 nm 10X 0.25

De mayor aumento 563.08 nm 40X 0.65

De inmersión 292.8 100X 1.25 oil

Tubo porta - objetivo de un microscopio de luz:

B.Microscopía electrónico.

-Un microscopio electrónico es aquél que utiliza electrones en lugar de fotones o luz visible para formar imágenes de objetos diminutos. Los microscopios electrónicos permiten alcanzar ampliaciones hasta 5000 veces más potentes que los mejores microscopios ópticos, debido a que la longitud de ondade los electrones es mucho menor que la de los fotones "visibles".

El primer microscopio electrónico fue diseñado por Ernst Ruska y Max Knoll entre 1925 y 1930, quienes se basaron en los estudios de Louis-Victor de Broglie acerca de las propiedades ondulatorias de loselectrones.

Un microscopio electrónico, como el de la imagen, funciona con un haz de electrones generados por un cañón electrónico, acelerados por un alto voltaje y focalizados por medio de lentes magnéticas (todo ello al alto vacío ya que los electrones son absorbidos por el aire). Un rayo de electrones atraviesa la muestra (debidamente deshidratada y en algunos casos recubierta de una fina capa metálica para resaltar su textura) y la amplificación se produce por un conjunto de lentes magnéticas que forman una imagen sobre una placa fotográfica o sobre una pantalla sensible al impacto de los electrones que transfiere la imagen formada a la pantalla de un ordenador. Los microscopios electrónicos producen imágenes sin ninguna clase de información de color, puesto que este es una propiedad de la luz y no hay una forma posible de reproducir este fenómeno mediante los electrones; sin embargo, es posible colorizar las imágenes posteriormente, aplicando técnicas de retoque digital a través del ordenador.

-limitaciones del microscopio electónico:

• El limitado diámetro de la apertura no permite que la información detallada alcance la imagen, limitando de este modo la resolución.

• El contraste de amplitud (que radica en la naturaleza corpuscular de los electrones) se debe al contraste de difracción, provocado por la pérdida de electrones del rayo. Es un contraste dominante en especímenes gruesos.

• El contraste de fase (que radica en la naturaleza ondulatoria de los electrones) se debe al contraste de interferencia provocado por los desplazamientos en las fases relativas de las porciones del rayo. Es un contraste dominante en especímenes finos.

• Existen también distintas aberraciones producidas por las lentes: astigmática, esférica y cromática

• El problema de la función de transferencia de contraste (CTF): la CTF describe la respuesta de un sistema

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