Morfología macroscópica en hongos

Práctica No. 3

Morfología Microscópica y Macroscópica de Hongos

OBJETIVOS

1. Realizar cultivos de hongos de algunos hábitat.
2. Leer la morfología macroscópica (colonial).
3. Realizar una tinción simple en fresco y en cinta adhesiva de hongos procedentes de distintas muestras naturales (morfología microscópica)

INTRODUCCIÓN

Los hongos son un grupo muy amplio y diverso.  Con más de 250 000 especies conocidas, constituyen un reino que incluye organismos unicelulares o levaduras, organismos filamentosos o mohos, y organismos que forman estructuras fructificantes, carnosas y macroscópicas, denomidos setas u hongos leñosos, dependiente de su morfología.  La rama de la Microbiología que estudia este complejo grupo de microorganismos es la Micología.

Como todos los animales, vegetales y protistas, los hongos son organismos eucariotas.  Además, los hongos son heterótrofos (utilizan compuestos orgánicos como fuente de carbono) y no son fototrofos (no utilizan la luz solar como fuente de energía).  Los hongos también son absortitos, es decir, que toman los nutrientes del medio igual que las bacterias, pasando las moléculas en solución a través de su membrana.

La mayoría de los hongos son también saprófitos, obteniendo los nutrientes por descomposición de la materia orgánica muerta.  Otros son parásitos: viven en el interior o sobre vegetales, animales y humanos, causando enfermedades.

Los habitat de los hongos son bastante diversos. Algunos son acuáticos, principalmente de agua dulce, aunque existen también algunos de medios marinos.  La mayoría de ellos son de medios terrestres, crecen en suelos o sobre materia orgánica en descomposición y contribuyen notablemente a la mineralización del carbono orgánico.  

Los hongos son típicamente quimioorganotrofos y tienen pocos requerimientos nutricionales.  Muchas especies pueden crecer en ambientes extremos con bajos pHs o altas temperaturas de hasta 62º y esto, junto con la ubicuidad de las esporas fúngicas, hace que sean los contaminantes más frecuentes de alimentos, medios de cultivo microbianos, etc. Sin embargo, los mohos y las levaduras no son clasificados sobre bases fisiológicas, sino por sus diferentes ciclos celulares que incluyen la formación de una gran diversidad de esporas.

MATERIAL

• Mechero Bunsen
• Asa de siembra
• Solución de benzal
• Portaobjetos y cubreobjetos
• Muestras enmohecidas de origen natural: tortilla, pan, frutas, etc
• Cinta adhesiva transparente
• Colorantes para tinción: azul de metileno al 1% o azul algodón lactofenol
• Microscopio
• Medios de cultivo estériles de PDA o Agar Sabouraud en placa
• Incubadora y autoclave

PROCEDIMIENTO

Cultivo de Hongos en Placa por la Técnica de Puntos

1. Limpiar la mesa de trabajo con algodón y solución de benzal.
2. Rotular 2 cajas de Petri con medio de cultivo sólido de PDA o Agar Sabouraud, en las que se sembrará en condiciones de esterilidad, a partir de las muestras enmohecidas y utilizando el asa micológica estéril, se depositarán pequeñas porciones de muestra en 5 puntos distribuidos en la caja.
3. Llevar a incubar las cajas de Petri a 28ºC durante 7 días.
4. Leer el desarrollo de las colonias.
5. La morfología colonial implica dar lectura a:

1. Color: verde, blanco, anaranjado.
2. Aspecto: algodonoso, aterciopelado, cremoso, húmedo, seco.
3. Pigmento: al reverso de la colonia.
4. Tiempo de crecimiento: anotar el número de días.

Preparación en Cinta Adhesiva

Técnica

1. Colocar sobre un portaobjetos una gota de azul de metileno o azul algodón lactofenol no demasiado grande para evitar que el crubreobjetos flote y la preparación quede demasiado gruesa.
2. Cortar un trozo de cinta adhesiva transparente de aproximadamente 2cm.
3. Tocar con el lado adhesivo de la cinta la superficie de la fruta o el pan enmohecidos o el borde de una colonia de hongo de un cultivo.  En la zona central de una colonia puede haber una excesiva concentración de esporas.
4. Pegar la cinta adhesiva sobre la gota del portaobjetos.
5. Eliminar el colorante sobrante con un papel de filtro.
6. Observar al microscopio con aumento 10X y 40X.  Leer tipo de hifas y esporas.
7. Desechar en el recipiente con benzal correspondiente.

RESULTADOS

CUESTIONARIO

1. Investiga la composición y utilidad del Agar Sabouraud.
   Este medio de cultivo es utilizado para cultivo de mohos y levaduras patógenas y no patógenas.

Es el medio estándar para la recuperación y mantenimiento de una gran variedad de hongos aislados de materiales clínicos. Tiene como ventaja su simple preparación y la obtención de colonias con caracteres macroscópicos típicos, su desventaja radica en que al tener una fuente de carbohidratos fácilmente utilizable por los hongos, estos desarrollan vegetativamente en forma exuberante pero con escasa fructificación, lo cual limita la identificación de la especie fúngica.

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