Métodos de detección de enterococos en agua

. Métodos de detección de enterococos en agua

El análisis de microorganismos indicadores en muestras de agua tiende a determinar la calidad sanitaria de la misma. Los métodos utilizados están diseñados para detectar el grado de contaminación del agua con desechos de origen humano y/o animal (1, 3).

Los métodos más utilizados para la determinación de enterococos en agua son la técnica de tubos múltiples y filtración por membrana. Ambas pruebas pueden ser utilizadas tanto para aguas frescas como aguas marinas (8).

a. Técnica de filtración por membrana

Se basa en la filtración de una muestra de agua para concentrar células (bacterias) viables sobre la superficie de una membrana y transferirlas a un medio de cultivo apropiado para contar el número de unidades formadoras de colonias (UFC) desarrolladas luego de un período de incubación (15). El método de filtración por membrana para detectar enterococos es utilizada desde 1985 para monitorear la calidad del agua. El análisis se realiza en 24 horas y es aplicable a aguas potables y recreacionales (2, 15). 16 Por este método se obtiene un conteo o recuento directo de bacterias en aguas, basado en el crecimiento de colonias en la superficie de un filtro de la membrana. La muestra es filtrada a través de la membrana que retiene las bacterias. Luego de la filtración se coloca la membrana sobre un medio selectivo y es incubado por 24 horas a 41 °C. Se ha propuesto una gran variedad de medios selectivos para identificar enterococos como Slanetz-Bartley (SB), Pfizer selective enterococus (PSE), mE agar, KF streptococcus agar y agar Kanamicina-Esculina (KAA). En el Anexo 4 se muestran los principios de reacción de algunos medios de cultivo para aislamiento de enterococos. Estudios anteriores han demostrado que los medios SB, mE agar y KAA presentan la mayor especificidad (5). Si se utiliza agar mE las colonias de enterococos presentan un halo azul. Después de la incubación se cuentan las colonias y se escogen aquellas cajas que contengan entre 20 a 60 colonias de bacterias. Para realizar el conteo, es aconsejable utilizar una lámpara fluorescente y un magnificador logrando así una mayor visibilidad de las colonias (16, 17).

Luego de obtener crecimiento bacteriano en el medio selectivo se verifica que las bacterias sean enterococos. Se seleccionan algunas colonias y se inoculan en caldo y en agar BHI, incubándose por 48 horas a 35 ± 0.5 °C. Después se transfieren colonias a los siguientes medios de cultivo: Agar Bilis Esculina (BEA) y se incuba por 48 horas a 35 ± 0.5 °C; caldo BHI con 6.5% de cloruro de sodio a 35 ± 0.5 °C por 48 horas y en caldo BHI a 45 ± 0.5 °C durante 48 horas. Se observa el crecimiento y se realizan frotes para tinción de Gram. Si se observan cocos Gram positivo que crecen en BEA, caldo BHI con 6.5% NaCl, caldo BHI a 45 °C e hidrolizan la esculina, son confirmados como enterococos (4, 9, 17).

Para calcular la cantidad de enterococos presente en la muestra de agua analizada se utiliza la siguiente fórmula:

Enterococos/100 mL = ((número de colonias contadas)/ (volumen de agua filtrada en mL)) * 100

El resultado se reporta como enterococos por 100 mL de muestra (3). El tiempo que aproximadamente tarda una muestra en ser procesada, siguiendo la técnica de filtración por membrana, es de 72 a 96 horas con la verificación de los enterococos pero sin identificar la especie. El

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