Ovariectomia

A. Ovariectomía.

Éste técnica comprende, bajo anestesia, los procedimientos quirúrgicos necesarios para la extirpación bilateral de los ovarios; esto con la finalidad de propiciar un estado de hipoestrogenismo en los animales de experimentación. La cirugía se realizó bajo anestesia (ver arriba). El área pélvica y abdominal se rasuró, limpió y desinfectó con yodo; posteriormente se realizó una incisión de aproximadamente 1.5 cm, separando la piel del músculo y se continuó con una segunda incisión de alrededor de 0.5 cm en el músculo, siguiendo la misma línea de incisión o sobre un costado de la primera para exteriorizar los ovarios. Los oviductos se ligaron con hilo de nylon y se cortaron por debajo de la ligadura. Después de la extirpación, se suturó con hilo de seda de 3 ceros para músculo e hilo de nylon para piel; finalmente, se limpió el sitio de cirugía con solución salina y se aplicó matacresa en aerosol (germicida de uso tópico) seguida de la administración del antibiótico por vía i.m. (enrofloxacina al 10%, 1.5 mg/kg) y analgésico (paracetamol, 316 mg/kg/día, v.o.).

B. Técnicas histológicas.

Para poder procesar las muestras de los órganos extraídos de los animales de experimentación, se seleccionó de manera aleatoria las muestras a analizar de cada uno de los grupos. La técnica realizada fue Hematoxilina-Eosina (H-E), para la cual, las muestras se tuvieron que fijar en una solución de Schulz-key (alcohol 96%, glicerina 70% y H2O; 3:1:1) para ser posteriormente sometidas a una deshidratación automática, en un aparato llamado HISTOKINETTE (WAS BATH® Mod. E7606), el cual consta de 12 pasos de una hora cada uno y son:

1. Formol (Fijador).

2. Alcohol al 70%.

3. Alcohol al 80%.

4. Alcohol al 96%.

5. Alcohol al 96%

6. Alcohol al 100%.

7. Alcohol al 100%.

8. Alcohol-Xilol 1:1 al 100%.

9. Xilol al 100%.

10. Xilol al 100%.

11. Parafina a 56-58ºC.

12. Parafina a 56-58ºC.

Posteriormente se realizó la inclusión en parafina. Este paso consiste en hacer penetrar un líquido solidificable de consistencia similar al tejido de estudio; en este caso parafina refinada especial para histología a un punto de fusión de 56-58ºC, en donde se colocan las muestras en un contenedor de tal forma que los cortes se estén de forma transversal al tejido, donde posteriormente se llenó con parafina líquida para poder obtener bloques. La técnica empleada para obtener los cortes del tejido que se montará y fijará más adelante fue la de cortes por parafina en un micrótomo (LEICZ®).

La técnica consistió en hacer rebanadas en serie del tejido con un grosor de 5-6 micras, las cuales se recogieron en portaobjetos de un baño maría a una temperatura de 56ºC; el agua del baño contenía gelatina bacteriológica marca Bioxon®

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