PCR MULTIPLEX PARA LA IDENTIFICACIÓN DE LOS PRINCIPALES VIRUS CAUSANTES DE ENFERMEDADES RESPIRATORIAS”

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UNIVERSIDAD AUTONÓMA DE GUERRERO UNIDAD ACADÉMICA DE CIENCIAS QUÍMICO-BIOLÓGICAS[pic 3]

PROGRAMA EDUCATIVO DEL QUÍMICO BIÓLOGO PARASITÓLOGO

              Reporte de Investigación Documental

“PCR MULTIPLEX  PARA LA IDENTIFICACIÓN DE LOS PRINCIPALES VIRUS CAUSANTES DE ENFERMEDADES RESPIRATORIAS”

PRESENTAN:

AQUINO LIMÓN BLANCA FLOR

CÁSTULO ARCOS ADRIANA ORICEL

CONTRERAS VARGAS MANUEL

PARRA VARGAS MERARY

RODRIGUEZ NAVA CYNTHIA

ESTEPHANIA YOSELI

ASESOR: Dr. Oscar Del Moral

Chilpancingo, Gro., a Marzo del 2014

Marco teórico

1. Resumen
2. Problema

La mayoría  de las enfermedades respiratorias que se presentan en niños de 0 a 5 años son  causadas por virus, entre los más comunes se encuentran: Virus Respiratorio Sincitial (VRS), Adenovirus y el Parainfluenza. La problemática se presenta en el momento de su identificación, ya que presentan sintomatología similar y el tratamiento no suele ser específico para el agente causal de esa enfermedad.

         ¿Cómo diseñar un PCR para la identificación eficaz de los diferentes virus que invaden el tracto                                          respiratorio?

1. Marco teórico

1. Generalidades

Las enfermedades de transmisión respiratoria emergentes representan un riesgo para la humanidad debido a su muy elevado potencial de diseminación. Estas enfermedades pueden producir altas tasas de morbilidad y mortalidad.

Las infecciones respiratorias en un 90% son de origen viral son la principal causa de infección de los seres humanos en  el aparato respiratorio superior, y en un 60 – 70 % en el aparato respiratorio inferior, presentándose principalmente en niños menores de 5 años. El desarrollo de nuevas técnicas moleculares ha permitido comprender y ampliar el conocimiento de los distintos virus respiratorios, tanto desde el punto de vista clínico como epidemiológico y para su correcto tratamiento. Se establecen 3 familias de virus entre los más frecuentes en niños son: Virus Respiratorio Sincitial (VRS), Adenovirus y el Parainfluenza (virus respiratorios).

1. Características de los principales virus

El Virus Sincitial Respiratorio

Pertenece a la familia Paramyxoviridae, subfamilia Pneumovirinae, y dentro de ella al género Pneumovirus.  Adicionalmente, el virus codifica para la proteína de la matriz M que está involucrada con la morfogénesis del virión, dos proteínas no estructurales NS1 y NS2 que participan en la replicación del virus y, la proteína SH, cuya función aún no está muy clara ya que al hacer una deleción de este gen el virus no pierde su viabilidad aunque es ligeramente menos virulento. El RNA viral está asociado a la nucleoproteína, fosfoproteína y la polimerasa viral, las cuales conforman la nucleocápside helicoidal. La replicación del genoma y síntesis de proteínas, se llevan a cabo en el citoplasma de la célula del hospedero, y luego, las nuevas partículas virales salen de la célula propagándose y alcanzando nuevos hospederos. En relación con el VSR se han identificado dos grupos antigénicos A y B, que difieren en la secuencia de aminoácidos de las glicoproteínas de superficie y principalmente la proteína G.

El VSR es el principal agente etiológico de IRAB en niños menores de 2 años, quienes presentan los cuadros clínicos más severos. Infecciones por VSR se detectan en un rango que oscila entre el 40% y 70%, de los niños hospitalizados, aunque afecta también a adultos mayores e individuos inmunocomprometidos (9). La primoinfección por VSR en niños, es en general sintomática, adquiriéndose en la mayoría de los casos en los primeros años de vida. Este virus es altamente contagioso y se disemina rápidamente en la comunidad durante las épocas frías, ocasionando brotes epidémicos todos los años. La infección por el VSR causa la destrucción del epitelio respiratorio con descamación y alteración ciliar, edema de la mucosa e hipersecreción de moco, además se asocia a una gran diversidad de manifestaciones clínicas que pueden variar desde síntomas del resfriado común (rinorrea, cefalea, malestar general), hasta infección respiratoria aguda grave (IRAG) con dificultad respiratoria, sibilancias, crepitaciones, cianosis y episodios de apnea.

En el VSR, hay dos grupos antigénicos, el subtipo A y el B que difieren principalmente en la secuencia de aminoácidos de la proteína de unión (Proteína G), esta proteína varia en un 44% aproximadamente entre los dos subgrupos, por otra parte, también se han observado diferencias cercanas la 20% en la proteína G dentro del mismo subgrupo antigénico. En este orden de ideas y por los argumentos expuestos anteriormente, se puede explicar como la variabilidad entre cepas favorece la habilidad del virus para evadir el sistema inmune y de esta forma establecer reinfecciones en un mismo hospedero

Virus de la influenza  

Los tres tipos de virus de la influenza (A, B y C) representan tres de los cinco géneros de la familia Ortomixoviridae. Aunque genéticamente estos virus tienen un ancestro común, han experimentado un grado de divergencia tal que la recomposición genómica (“reassortment”) (intercambio de segmentos genómicos entre virus) reportada solo ocurre entre virus del mismo género o tipo. El genoma de los virus de la influenza A y B consiste de ocho segmentos de RNA genómico de sentido negativo que codifican 11 proteínas. Los segmentos uno, tres, cuatro y cinco codifican las proteínas PB2,PA, HA (hemaglutinina) y NP, respectivamente. La subunidad PB1 de la RNA polimerasa dependiente de RNA es codificada por el segmento dos. En algunas cepas del virus de la influenza A, este segmento codifica además, en otro marco de lectura alternativo, una proteína accesoria PB1-F2. La proteína NA (neuraminidasa) en los virus de la influenza A es codificada por el segmento seis, mientras que en los virus de la influenza B este segmento codifica además, en un marco de lectura alternativo, la proteína de la matriz NB, la cual corresponde a la proteína M2 del virus de la influenza A . El segmento siete de los virus de la influenza A y B codifica la proteína de la matriz M1, aunque en el caso del virus de la influenza A la proteína del canal iónico M2 también es expresada por este segmento, previo procesamiento (“splicing”) de RNA. La proteína antagonista del interferón, NS1, de los virus de la influenza A y B es expresada por el segmento ocho, así como la proteína NP/NS2, previo procesamiento de RNA. En la superficie lipídica de la partícula viral se encuentran las proteínas HA, NA y M2. El precursor de HA (HA0) es sintetizado como un solo polipéptido que debe ser fragmentado en dos polipéptidos, HA1 y HA2, unidos por un enlace disulfuro. Esta modificación post-traduccional, necesaria para la infectividad, es llevada a cabo por la acción de una serín-proteasa específica del hospedero. Los aminoácidos presentes en el sitio de corte proteolítico son muy importantes en la determinación de la virulencia del virus. La HA tiene dos regiones estructurales distintas. La porción HA1 contiene el sitio para la unión al receptor de ácido siálico y también los sitios antigénicos para la unión de anticuerpos. La porción HA2 participa en la fusión de la cubierta lipídica del virus con la membrana de la célula hospedera.

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