PRÁCTICA 2: “SALADO” (SALTING OUT) DE PROTEÍNAS, SU APLICACIÓN EN LA SEPARACIÓN Y DETERMINACIÓN DE ALBUMINAS Y GLOBULINAS EN SUERO O PLASMA SANGUÍNEO

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Universidad de Oriente

Núcleo de Bolívar

Escuela de Cs. de la Salud “Dr. Francisco Virgilio Battistini Casalta”

Departamento de Ciencias Fisiológicas

Medicina

Asignatura: Laboratorio de Bioquímica

Grupo: Jueves “A”

PRÁCTICA 2: “SALADO” (SALTING OUT) DE PROTEÍNAS, SU APLICACIÓN EN LA SEPARACIÓN Y DETERMINACIÓN DE ALBUMINAS Y GLOBULINAS EN SUERO O PLASMA SANGUÍNEO

Docente:                                                                                                      Bachilleres:

González, Rafael                                                       María K, Díaz F. C.I.: 27.299.888

                                                                               Marchán G, José L. C.I.: 28.298.763

                                                                                Moreno S, Ana M. C.I.: 28.415.254

                                                                   Romero Díaz, Betania DV. C.I.: 27.837.774        

Ciudad Bolívar, 14 de noviembre del 2019

INTRODUCCIÓN

Dentro de todas las células vivas, existen diversos compuestos macromoleculares que le confieren en gran parte la capacidad de ejercer sus funciones, y en cuanto esos compuesto uno de los más importantes son las proteínas, las cuales cumplen una variedad extensa de funciones en el organismo, actuando como agentes en procesos de inmunidad por invasiones de bacterias o virus y como mediadores de procesos catalíticos suministrando la energía necesaria para el organismo , así como también encargándose del transporte celular de muchas moléculas. Un ser humano produce de 25000 a 35000 proteínas distintas y la podemos encontrar en cualquier rincón de nuestro cuerpo, desde los órganos, glándulas, músculos hasta los líquidos corporales como la sangre.

Un gran número de proteínas forman parte de la sangre y específicamente del plasma sanguíneo, el cual está compuesto de electrólitos, metabolitos, proteínas, agua, hormonas y que carece por completo de células, ya que es la sangre sin el paquete celular. También se encuentra en el suero sanguíneo que no posee células ni proteínas implicadas en la coagulación sanguínea, lo que representa una diferencia entre ambos. Cabe destacar que las proteínas plasmáticas abarcan tanto proteínas simples como proteínas conjugadas tales como glucoproteínas y lipoproteínas, siendo su valor de referencia normal de 6,5-8,0 g/dl.

Existen dos tipos de proteínas que son las más importantes en el plasma, la primera es la albumina, qué es sintetizada por el hígado y participa en múltiples proceso como el mantenimiento del 80% de la presión oncótica de la sangre y transporte de sustancias hidrófobas en sangre. Las otras son las globulinas que se caracterizan  por estar presentes en todos los animales, que también son sintetizadas principalmente por el hígado y se dividen en tres tipos: alfa, beta y gamma, donde se debe resaltar  que las globulinas gamma son las principales del sistema inmune, y  entre sus funciones importantes se tiene que son inhibidoras de proteasas y transportan diversas sustancias.

Existen diferentes maneras de estudiar las proteínas debido a  las propiedades de estas (tamaño, carga, propiedades de unión)  las cuales varían de una proteína a otra. Estos métodos son realizados a través de solventes y/o electrolitos y con ellos se logra  la separación individual de estas. De este modo se pueden separar las proteínas del plasma: albúminas y globulinas.

Existe un método de precipitación salina denominado el ‘’Salting out’’ de proteínas, basado en que la solubilidad de una proteína disminuye a altas concentraciones de sales neutras, lo que evita que esta sea solubilizada en agua y que la proteína precipite, por lo que el método permite separar  proteínas, en este caso albuminas y globulinas en el suero y plasma sanguíneo, asimismo, se puede diferenciar y conocer, a través de métodos colorimétricos con los reactivos de Biuret y el verde de bromocresol y mediante la realización de graficas de tendencia , la concentración de ambas proteínas para poder cuantificar la cantidad de proteínas séricas totales en un sujeto, para poder determinar si posee valores normales, o algún valor patológico, que puede ser de suma importancia en el diagnóstico de una gran cantidad de enfermedades.

REPORTE DE RESULTADOS

Proteínas Totales: “Método Biuret”

1. Se determinaron los mg de proteínas que contiene cada tubo, a partir de la proporción del patrón estándar de proteínas, a través del siguiente calculo típico:    

8 mg 🡪 1 ml

X mg 🡨 0,25 ml

X= 2 mg de proteínas

En donde X= 2 mg  representa la cantidad de proteínas en mg que hay en el tubo número 1 en donde hay 0,25 ml del estándar de proteínas cuya concentración es 8mg/ml. Al realizar el cálculo con cada uno de los tubos se obtuvieron los resultados expresados en la Tabla 1. 

        Tabla 1: Valores de absorbancia y mg de proteínas obtenidos en cada tubo.

Fuente: Datos obtenidos en el laboratorio de bioquímica de la Escuela de Cs. de la Salud UDO – Núcleo Bolívar. 7 de  noviembre de 2019.

1. Se elaboró una gráfica de tendencia o curva de calibración a partir de los valores de la Tabla 1, siendo reflejada como variable independiente la absorbancia y como variable dependiente la cantidad de proteínas (mg de proteínas). Corresponde a la Gráfica 1.

Grafica 1: Curva de calibración de proteínas totales obtenida por el método colorimétrico, usando el reactivo de Biuret. [pic 2]

Fuente: Datos obtenidos en el laboratorio de bioquímica de la Escuela de Cs. de la Salud UDO – Núcleo Bolívar. 7 de  noviembre de 2019.

1. Se obtuvo a partir de la Gráfica 1 los mg de proteínas del tubo muestra, trazando una recta paralela al eje X que partió desde el valor de absorbancia del tubo muestra hasta interceptar la recta obtenida de la gráfica, y desde ese punto de corte por extrapolación en el plano X, cuyo valor por estimación fue de 7,2 mg.

1. Se convirtió el valor estimado de mg de proteínas del tubo muestra a las unidades de gr/dl, primero determinando la cantidad de proteínas en mg que habría en 1 dl, con la siguiente regla de 3:

0,1 ml de suero 🡪 7,2 mg de proteínas

100 ml (1 dl) de suero 🡪 X mg de proteínas

X= 7200 mg de proteína

        Y segundo transformar los mg que hay en 1 dl  en gr, aplicando el método de reducción, de la siguiente manera:

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