Practica Amilasa

PRINCIPIO DEL MÉTODO

La a-amilasa hidroliza el 2-cloro-4-nitrofenil-a-D-maltotriósido (CNPG3) a 2-cloro-4-nitrofenol (CNP) y forma 2-cloro-4-nitrofenil-a-Dmaltoside (CNPG2), maltotriosa (G3) y glucosa (G), según la siguiente reacción:

10 CNPG3 Amilasa 9 CNP + 1 CNPG2 + G3 + G

La velocidad de formación de 2-cloro-4-nitrofenol, determinado fotométricamente, es proporcional a la concentración catalítica de a-amilasa en la muestra ensayada.

SIGNIFICADO CLÍNICO

La a-amilasa (AMS) es una enzima que ayuda a digerir el glucógeno y el almidón. Se produce principalmente en las glándulas salivales y el páncreas exocrino. Su determinación se realiza principalmente para diagnosticar o controlar enfermedades del páncreas como pancreatitis crónica o aguda. Puede reflejar también enfermedad de la vesícula biliar, algunos problemas gastrointestinales y otros trastornos.

El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.

REACTIVOS

R

MES pH 6,0 100 mmol/L

CNPG3 2,25 mmol/L

Cloruro sódico 350 mmol/L

Acetato cálcico 6 mmol/L

Tiocianato potásico 900 mmol/L

Ácida sódica 0,95 gr/L

MATERIAL ADICIONAL

- Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 405 nm.

- Baño termostatable a 37ºC

- Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.

- Equipamiento habitual de laboratorio

MUESTRAS

- Suero o plasma, separado lo antes posible de los hematies. Como anticoagulante se recomienda la heparina.

- Orina, ajustar el pH aproximadamente a 7,0 antes de conservar. Estabilidad: 1 mes a 2-8ºC.

PROCEDIMIENTO

1. Condiciones del ensayo:

Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .405 nm

Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .1 cm paso de luz

Temperatura constante . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37ºC

2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.

3. Pipetear en una cubeta:

Suero o plasma

Orina

R (mL)

1,0

1,0

Muestra

20

10

4. Mezclar, incubar 30 segundos.

5. Leer la absorbancia (A) inicial de la muestra, poner en marcha el cronometro y leer la absorbancia cada minuto durante 3 minutos.

6. Calcular el promedio del incremento de absorbancia por minuto.

VALORES DE REFERENCIA

Suero o plasma

Hasta 90 U/L de a-amilasa

Orina

Hasta

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