Precipitación, separación y punto isoelectrico de proteínas
Enviado por Paulina Esquivel • 28 de Agosto de 2019 • Práctica o problema • 749 Palabras (3 Páginas) • 435 Visitas
Introducción:
El punto isoeléctrico se define como el pH en el cual el número de cargas positivas se iguala al número de cargas negativas que aportan los grupos ionizables de una molécula. En el punto isoeléctrico la carga neta de la molécula es cero (0). En los aminoácidos los grupos ionizables corresponden a grupos carboxilos, amino, fenólicos y tiólicos.
La presencia de grupos ionizables en éstas moléculas tiene importantes consecuencias sobre la solubilidad.
Los aminoácidos y las proteínas son menos solubles en su punto isoeléctrico si las demás condiciones permanecen iguales. Esto se debe a que los iones dipolares no presentan carga neta y cristalizan en forma de sales insolubles a ese pH.
Objetivo:
-Analizar el efecto que produce la modificación de factores fisicoquímicos sobre la solubilidad de las proteínas.
-Determinar el punto isoeléctrico de la insulina, basándose en sus propiedades de solubilidad a diferentes valores de pH
Resultados:
Tabla 1. Salting-out.
Biuret | Interpretación | |
Sobrenadante | + | Hay presencia de proteínas |
Precipitado 1 | + | Hay presencia de proteínas |
Filtrado | - | No hay proteínas |
Precipitado 2 | + | Hay presencia de proteínas |
Tablas 2. Precipitación por efecto del pH y solventes.
Tubo | 1 | 2 | 3 |
Clara de huevo | 3.0 ml | 3.0 ml | 3.0 ml |
HCl 0.1N | 1.0 ml | ||
NaOH 0.1N | 1.0 ml | ||
Regulador de acetatos pH 4.7 | 1.0 ml | ||
Observaciones | Precipitado | Transparente (no hay pp.) | Precipitado |
Etanol 96° | 3.0 ml | 3.0 ml | 3.0 ml |
Observaciones | Mayor precipitado | Transparente | Mayor precipitado |
Tabla 3. Precipitación por metales pesados.
Tubo | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
Clara de huevo | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
HgCl2 5% (ml) | 0.25 | ||||
AgNO3 2% (ml) | 0.25 | ||||
Pb(C2H3O2)2 (ml) | 0.25 | ||||
Cloruro de sodio 5% (ml) | 0.25 | ||||
Agua (ml) | 0.25 | ||||
Observaciones | Precipitado | Precipitado | Precipitado | transparente | Opalescente |
Tabla 4. Determinación del punto isoeléctrico de la insulina:
Tubo | Ac. acético | Acetato de sodio | Insulina | pH | Observaciones |
1 | 0.23 ml | 0.02 ml | 6 U | 3.73 | 0 |
2 | 0.15 ml | 0.1 ml | 6 U | 4.58 | 0 |
3 | 0.05 ml | 0.2 ml | 6 U | 5.36 | ++ |
4 | 0.01 ml | 0.24 ml | 6 U | 6.14 | + |
5 | 0 ml | 0.25 ml | 6 U | 9.6 | 0 |
Discusión:
“Salting out”
A bajas concentraciones las sales incrementan la solubilidad de las proteínas (Salting in) ya que los contraiones adicionales recubren con mayor eficacia las numerosas cargas iónicas de las moléculas proteicas, pero en mayores concentraciones provocan su precipitación debido al aumento de interacciones hidrofóbicas entre ellas al ser retirada su esfera de solvatación por los iones salinos.
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