Purificacion Adn Plasmidico
Enviado por emi025 • 26 de Noviembre de 2012 • 618 Palabras (3 Páginas) • 573 Visitas
39. Aislamiento y purificación del DNA de un
plásmido recombinante
Aurora Galván Cejudo, Manuel Tejada, Antonio Camargo, José
Javier Higuera, Vicente Mariscal, Emilio Fernández Reyes
Departamento de Bioquímica y Biología Molecular, Campus Universitario de Rabanales,
Edificio Severo Ochoa, 14071-Córdoba
RESUMEN
El DNA de un plásmido recombinante presente en una bacteria se aísla
por un método rápido y sencillo (“miniprep”) que consiste en lisis
bacteriana, precipitación de proteínas y DNA genómico, y finalmente
precipitación del DNA plasmídico. El objetivo es obtener suficiente
cantidad del DNA para su análisis posterior mediante electroforesis.
Palabras clave: DNA plasmídico, lisis alcalina, eficiencia de la purificación
Abreviaturas empleadas. DNA: ácido desoxirribonucleico; IPTG, isopropil-β-Dtiogalactopiranósido; LB: medio de Luria-Bertani; RNasa, Ribonucleasa.
1. INTRODUCCIÓN Y OBJETIVOS
Los plásmidos son moléculas de DNA extracromosómico, circular y
generalmente de pequeño tamaño que se encuentran en muchas especies
bacterianas y que se pueden replicar de manera independiente del DNA
cromosómico. A diferencia de éste, los plásmidos no son necesarios para la
viabilidad general de la célula, pero pueden contener genes que contribuyen a
la supervivencia en condiciones especiales, como los que confieren resistencia
a antibióticos, a metales etc. Algunas clases de plásmidos poseen además la
propiedad conocida como "replicación relajada", esto es, están presentes en
forma de muchas copias por célula, lo que facilita enormemente su aislamiento
y purificación.
Los plásmidos poseen un interés singular en Ingeniería Genética por ser uno
de los sistemas vectores más sencillos de usar. Un vector de clonación es un
sistema que permite introducir en una célula hospedadora un fragmento de
DNA que se pretende clonar; en esta célula hospedadora el vector se replica y
expresa, en su caso. La molécula que resulta de la unión de un DNA vector con
el DNA de interés (denominado entonces "inserto") se denomina molécula de
vector recombinante.
Para ser utilizado como vector de clonación, un plásmido ideal debe poseer
al menos tres características: 1) Debe tener su propio origen de replicación y
por tanto la capacidad de replicación autónoma independiente del genoma del
hospedador. 2) Debe tener sitios de clonación múltiple que permitan la apertura
del DNA con enzimas de restricción y hace posible la clonación de insertos de
1 DNA en la forma y orientación determinada. 3) Debe poseer marcadores
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