Que es la Inmunohistoquímica

INMUNOHISTOQUÍMICA

Diana Carolina Muñoz Jiménez

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INDICE

Presentación …………………………………………………………………….. Pg 4

Objetivos del proyecto ………………………………………………….…. Pg 3

Introducción ……………………………………………………………….. Pg 3

Ac monoclonales y policlonales …………………………………………... Pg 4

• Diferencias entre Ac monoclonales y policlonales.

Técnica ELISA ……………………………………………………………. Pg 6

Proceso previo a la técnica

• Fijación ……………………………………………………………. Pg 8
• Tallado, inclusión y corte …………………………………………. Pg 8

Métodos de recuperación antigénica ……………………………………… Pg 9

Bloqueo de la peroxidasa endógena ………………………………………. Pg 10

Incubación de Ac …………………………………………………………. Pg 11

• Ac primario.
• Ac secundario.

Marcaje de Ac …………………………………………………………….. Pg 12

• Métodos inmunohistoquímicos

• Directo.
• Indirecto

• Peroxidasa Antiperoxidasa.
• Avidina Biotina Peroxidasa (ABC).

• Otras técnicas

• Enzimas.
• Doble marcaje.
• Inmunofluorescencia.

Diaminobencidina (DAB) ………………………………………………….. Pg 14

• Función.
• Uso.
• Ventajas y desventajas.

Contraste ……………………………………………………………………. Pg 16

Sistema manual y automático ………………………………………………. Pg 16

Bibliografía ………………………………………………………………… Pg 18

PRESENTACIÓN.

Diana Carolina Muñoz Jiménez

Técnico superior de Anatomía Patológica del Centro Juan de Mairena, de la familia profesional sanitaria, situado en San Sebastián de los Reyes.

PROYECTO.

Objetivos.

El objetivo principal de esta investigación es detallar el procedimiento que conlleva la obtención de una biopsia, autopsia o material citológico y la aplicación de técnicas inmunohistoquimicas, para su posterior estudio y observación al microscopio, para conocer en que situaciones se requiere un estudio inmunohistoquímico y disponer de esquemas precisos de estudio en el diagnóstico de situaciones frecuentes e inciertas.  

Introducción.

Antes de entrar en la explicación del concepto de inmunohistoquimica, debemos tener en cuenta que el uso de tinciones de tejidos se realizó con el fin de facilitar su observación microscópica, siendo la primera técnica la hematoxilina-eosina en el siglo XIX. Más tarde, en el primer tercio del siglo XX, se introduce la inmunoenzimología que utilizaba tejidos sin fijar y de la que quedan únicamente restos.

La primera inmunohistoquímica, se realizó con Ac fluorescentes sobre tejidos frescos, como se hace en la actualidad en diversas enfermedades de la piel y el riñón, sin embargo, el método Avidina-biotina y el método peroxidasa, permiten amplificar la señal del cromógeno, favoreciendo la utilización de tejidos fijados en formol e inlcuidos en parafina.

La inmunohistoquímica o IHQ es una técnica que permite localizar moléculas en los tejidos  que han sido fijados en formol y embebidos en parafina, mediante el uso de anticuerpos. Esta técnica, por la gran especificidad y alta afinidad de los anticuerpos para reconocer moléculas y unirse a ellas, permite detectar cantidades ínfimas de moléculas presentes en el tejido.

Por otro lado, exponemos los conceptos básicos que permitirán la compresión técnica, entre ellos:

• Antígenos: son las sustancias capaces de producir la respuesta inmune.

Entre sus propiedades inmunológicas destacamos; inmunogenicidad (capacidad de producir una respuesta específica humoral o celular) y antigenicidad (capacidad de combinarse con anticuerpos y/o receptores de células).

• Epítopos: son cada uno de los sitios discretos de una macromolécula, reconocidos individualmente por un anticuerpo específico o por un TCR (receptor de linfocito T) específico. Son regiones inmunológicamente activas.
• Anticuerpos: también conocidos como inmunoglobulinas (Ig) son glicoproteínas del tipo gamma globulina. Pueden encontrarse de forma soluble en la sangre u otros fluidos corporales de los vertebrados, disponiendo de una forma idéntica que actúa como receptor de los linfocitos B y son empleados por el sistema inmunitario para identificar y neutralizar elementos extraño. Estas se clasifican en función de la cantidad que se pueda hallar en el suero; siendo:

• IgG: es la única que es transmitida de la madre al feto.
• IgA: la encontramos en mayor parte en secreciones corporales.
• IgM: se encuentra circulante.
• IgD: se encuentra como molécula de membrana en los linfocitos B.
• IgE: aparece en alergias o infecciones por parásitos.

Las inmunoglobulinas presentan una estructura formada por dos tipos de cadenas proteicas; una de ellas conocida como cadena pesada y la otra como cadena ligera.

• Complejo antígeno-anticuerpo (Ag-Ac): se trata de la unión específica, consecuencia de uniones débiles como puentes de hidrógeno, fuerzas de Van Der Waals, interacciones electroestáticas e hidrofóbicas, con el fin de inhibir la toxicidad del Ag.

Esta reacción se caracteriza principalmente por la rapidez, especificidad, espontaneidad y reversibilidad.

Obtención de anticuerpos policlonales y monoclonales.

En el caso de los Ac policlonales, se obtienen administrando el antígeno a los animales, que bien pueden ser, conejos, ratones, cerdos, cabras, entre otros. Pero antes de inocular al animal, es necesaria una previa selección, en función de:

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