RFLP

RESULTADOS

Se colocaron 4 muestras diferentes de la siguiente manera: [pic 1]

Escena del crimen (EC)Sospechoso 1 (S1)

Sospechoso 2 (S2)Sospechoso 3 (S3)

Se simuló un asesinato en donde EC fue la muestra de DNA encontrada en el lugar y S1, S2 y S3 los posibles sospechosos Se les extrajo DNA, para poder hacer la prueba correspondiente, en donde las muestras se colocaron en hielo, después se les coloca a cada tubo (con muestra de DNA) una solución de enzimas de restricción. Se agitaron los tubos y se incubaron por 45min a 37°C.se preparó el equipo para la electroforesis y se corrió a 90-100V por 45 min aprox.

Después de teñir y lavar, se observó el corrimiento al igual de dos de las muestras: EC y S1, por lo que el culpable es el S1.

DISCUSIÓNCuando hablamos de polimorfismo de longitud de fragmentos de restricción (RFLP) nos referimos a secuencias específicas de nucleótidos en el DNA que son reconocidas y cortadas por las enzimas de restricción (también llamadas endonucleasas de restricción) y que varían entre individuos. Las secuencias de restricción presentan usualmente patrones de distancia, longitud y disposición diferentes en el ADN de diferentes individuos de una población, por lo que se dice que la población es polimórfica para estos fragmentos de restricción. La técnica RFLP se usa como marcador para identificar grupos particulares de personas con riesgo a contraer ciertas enfermedades genéticas, en ciencia forense, en pruebas de paternidad y en otros campos, ya que puede mostrar la relación genética entre individuos (Griffiths, 2002). Los RFLP pueden ser utilizados para medir la diversidad genética entre diferentes poblaciones o especies relacionadas, la diferencias en los sitios de restricción es efectivamente una diferencia en el ADN, por lo tanto la medida del número total de RFLP diferentes representa una medida de la diferencia genética, importante en los estudios evolutivos. (Griffiths 2000).

Las enzimas de restricción o endonucleasas, cortan el DNA en secuencias muy específicas (denominadas dianas de restricción), dando lugar a fragmentos de tamaños diferentes que pueden ser analizados mediante electroforesis en geles de agarosa. Esta especificidad de secuencia implica que el tratamiento de una molécula de DNA con una enzima de restricción debe producir siempre el mismo conjunto de fragmentos (Brown, 2008). Sin embargo, existen sitios polimorfos los cuales son dos alelos; uno presenta la secuencia correcta y el segundo alelo muestra una alteración en la secuencia, lo que coincide con lo dice Kelley (1992): un RFLP presenta un cambio relativamente común en la secuencia de DNA creando un sitio de reconocimiento entre ellos.

En la parte de digestión con enzimas de restricción, fue de suma importancia mantener la temperatura a 37°C ya que ésta es la temperatura óptima para que la enzima pueda realizar su función. Si hubiese aumentado la temperatura se hubiese desnaturalizado. También fue importante respetar el tiempo en el que se incubó, si el tiempo se excede, la enzima hace un “efecto estrella”.

Las enzimas utilizadas fueron EcoRI y PstI. EcoRI es muy utilizada. Esta enzima reconoce y corta el ADN siempre que localiza la secuencia de bases 5’-GAATTC-3’, una secuencia palíndroma (como es característico de las enzimas del tipo II). Las secuencias de este tipo tienen la propiedad de que leyendo cualquiera de las dos cadenas en el sentido 5’-3’, se lee la misma de bases nitrogenadas. La enzima EcoRI hidroliza los enlaces fosfodiéster que unen las bases G y A de cada hebra, de este modo los cortes que crea son escalonados y dan lugar a la formación de fragmentos de ADN cuyos extremos tienen una corta región monocatenaria que resultará complementaria a las de los otros fragmentos. Los extremos pueden permanecer asociados por puentes de hidrógeno o desnaturalizarse (según sean las condiciones de salinidad, temperatura, etc.), produciendo entonces segmentos independientes, que se reasocian muy fácilmente, por lo que tales extremos reciben el nombre de extremos cohesivos o extremos “pegajosos”. (Devlin, 2004).

...