SM1 “Identificar microorganismos con base en técnicas bacteriológicas.”

Practica num. 1

“Preparación de medios de cultivo”

Alumna: Alexia Marquina R

3º“F”

Maestra: Virginia Brito R.

SM1 “Identificar microorganismos con base en técnicas bacteriológicas.”

Propósito: el alumno conocerá el procedimiento para la realización de medios de cultivo.

Introducción: el agar macConkey se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos, permite diferenciar bacterias que utilizan o no lactosa en muestras químicas de agua y alimento.

El agar EMB utilizado para el aislamiento de bacterias Gram negativas de rápido desarrollo, diferencia entre las colonias de organismos fermentadores de lactosa y aquellas que no la fermentan.

Agar Salmonella Shigella medio de cultivo utilizado para el aislamiento de salmonella y de algunas especies de shigella a partir de heces. Es medio de cultivo selectivo y diferencial.

Agar 110 es utilizado para el aislamiento y diferenciación de estafilococos en base a la fermentación de manitol, la formación de pigmento y la hidrólisis de gelatina.  

Agar Sal y Manitol fomenta el crecimiento de un grupo de ciertas bacterias mientras que inhibe el crecimiento de los demás, es selectivo para bacterias  Gram positivas estafilococos.

Agar Sangre es una combinación de un agar base (agar nutritivo) con el agregado de 5 % de sangre ovina, también puede usarse sangre humana, para cultivos en una placa de Agar. El agar sangre aporta muchos factores de enriquecimiento.

Material: -Charola. -Medios de cultivo (MacConkey, EMB, Salmonella Shigella, Sal y Manitol, Agar 110 y Agar Sangre). –Agua destilada. – abatelenguas. –Algodón. –Gasas. –Papel kraft. –Cinta testigo. –Masking tape. –Soporte metálico universal. –Tela de asbesto. –Pinzas para matraz. –Matraz Erlenmeyer 500 ml. –Una probeta. –Cubre bocas. –Cajas de Petri con división. –Balanza granataria. –Autoclave. –Gorro desechable.

Procedimiento:

1. Con ayuda de una balanza granataria se va a pesar un pedazo de papel kraft llevando a 0 la balanza, calibrando la bascula de forma que se encuentre lista y se pesa el papel, se anota el resultado del peso del papel.

2.Se selecciona los agares a realizar: Agar Sangre, se observa el frasco del agar indicaciones modo de preparación, anotar cuanto de agar se requiere para un L. del mismo. Si se requiere preparar 350 ml. De agar sangre se realiza una regla de tres.

3.Colocar agua destilada en el matraz Erlen Meyer a la cantidad deseada (350ml)

4.Se vacía el contenido del polvo del Agar en el Matraz con agua destilada y se mezcla aforando a la cantidad deseada.

5.Realizar un tapón para el matraz Erlen Meyer con ayuda de una gasa y algodón y se realiza el tapón. Se realiza un tapón de papel Kraft. Antes de tapar el agar se coloca sobre el soporte metalico y sobre la tela de asbesto, se deja que se disuelva el polvo del agar mezclando constantemente del Agar, una vez que hierve el agar esta listo para sacarlo de la flama del mechero.

6.Se pone a enfriar el Agar bajo la llave del agua o se coloca directamente a la autoclave todos los frascos matraz con agar, se cierra el auto clave se aseguran los tornillos y se esterilizan los medios de cultivo a 120º durante 15 min. A 15 Lbs de presión.

7.Una vez concluido el tiempo dejar que la valvula llegue a 0 para poder abrir la auto clave una vez terminado, se abren los tornillos y con mucho cuidado se abre la tapadera del auto clave.

8.Se sacan los medios de cultivo con las pinzas para matraz. Se enfrían los medios de cultivo en un termino medio o tibio, se colocan 2 mecheros en cendidos en la mesa de trabajo, manteniendo estéril el área de esta forma.

9.Se esteriliza la boca del matraz donde se encuentra el medio de cultivo, pasando la flama del mechero. Se alistan las cajas Petri y se vacía el Agar en su lugar correspondiente. Al final de cada vaciado de medio de cultivo el mechero se invierte.

Procedimiento para el Agar Sangre:

1.        Con ayuda de una balanza granataria se va a pesar un pedazo de papel kraft llevando a 0 la balanza, calibrando la bascula de forma que se encuentre lista y se pesa el papel, se anota el resultado del peso del papel.

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