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INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL[pic 1][pic 2]

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

Laboratorio de Métodos de Análisis

Práctica “Estudio de algunos factores que afectan el establecimiento de un método espectrofotométrico”

• Objetivo.

Conocer algunos de los parámetros que afectan el establecimiento de un método espectrofotométrico como son el pH, la estabilidad del color, la concentración del cromógeno, la presencia de sustancias extrañas al desarrollo de color y el intervalo de tiempo al que este es estable. Elaborar una curva de calibración, obtener la sensibilidad, el % de error fotométrico del método y el límite de detección calculado por el método de Ringbom.

• Resultados.

Resultados de la selección de tubos.

Tabla 1. Selección de tubos comunes para usarlos como celdas.

Aquellos tubos que tienen una superficie homogénea y paredes de igual grosor para que al incidir luz sobre ellos produzcan efectos ópticos similares, por otro lado el diámetro interno equivalente se refiere a que la luz incidida al tubo atraviese el mismo grosor o paso de luz en todos los tubos.

 Curva de calibración.

Tabla 5. Curva de calibración de Fe3+ por el método de NH4SCN.

Cálculos para obtener  los Fe3+ (µg/ml) 

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Ejemplo. Para el tubo No.12

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Para obtener la absorbancia teórica se hizo regresión lineal en la calculadora obteniendo un valor de la pendiente de 0.125 (b), una ordenada al origen de 0.001 (a) y un coeficiente de correlación del 0.9998 (r).

Para obtener la absorbancia teórica o ajustada utilizamos la ecuación de la recta

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Donde “y” es la absorbancia teórica, “b” la pendiente, “x” la concentración de Fe3+ y “a” la ordenada al origen. Por lo tanto [pic 6]

Ejemplo. [pic 7]

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La grafica sigue la ley de Bouger y Beer ya que existe una tendencia lineal entre la absorbancia y la concentración de Fe3+, y al hacer regresión lineal en la calculadora obtenemos un coeficiente de correlación del 0.9998.

La sensibilidad del método la calculamos sacando la inversa de la pendiente por lo que tenemos una sensibilidad con un valor de 8.

El intervalo de concentración va de 0.7 a 10.85 Fe3+ (µg/ml), y el intervalo de lectura útil va de 50.34 a 79.35 de absortibidad.

Para obtener el límite de detección del método, utilizamos la fórmula

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Después al tener el valor de S ocupamos la ecuación LDD=3S/b

Por tanto LDD= 0.008

Método de Ringbom para determinar el % EP.

Tabla 6. Datos para aplicar el método de Ringbom en la determinación de Fe3+ por el método del SCN-.

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