Tetrazolio

PRUEBA DE TETRAZOLIO

Es un método bioquímico en el cual no se mide la germinación sino la viabilidad por la coloración que toman las semillas puestas en una solución de Tetrazolio. Las semillas absorben esa sustancia dentro de las células de tejidos vivos biológicamente activos, donde la reacción química la cambia a un compuesto insoluble de color rojo, diferenciándose así –por la tinción- el tejido viable del no viable. La prueba puede indicar, además, presencia de problemas mostrando, por ejemplo, manchas con poca tinción, sin colorear o sin teñirse en distintos puntos, como la radícula o las extremidades de los cotiledones.

Por ser tan puntual en su resolución, la prueba necesita seguir procedimientos estandarizados, requiriendo capacidad y destreza profesional para evaluar sus resultados.

El breve tiempo requerido para realizarlo (entre 24 y 48 horas, según la especie) y las dificultades que resuelve el método, hacen que esta medición de viabilidad sea utilizada como test rápido (y, si bien guarda relación, no debe tomarse como indicador del método de poder germinativo (PG) en cámara; de hecho que las normas de comercialización de semillas sólo consideran el PG).

Proceso de laboratorio

Seguidamente se describe el proceso de laboratorio para la determinación de este test rápido, que permitirá al lector tener una mayor comprensión de lo que expresan sus resultados: Acondicionamiento de las semillas:

• Remojado en agua para hidratar la semilla y activar su sistema bioenzimático, facilitando el corte o remoción de las cubiertas seminales.

• La mayoría de las semillas requiere además una preparación para la absorción del tetrazolio, como separar los embriones por completo; hacer cortes en los embriones longitudinal o transversalmente. Otras no necesitan más preparación. Luego se ponen a remojar en la solución de tetrazolio según el tiempo indicado para cada especie. Ejemplo: en maíz entre 16 y 20 horas, (temp. 30º C), luego se hace un corte longitudinal por lo angosto y se pone a tinción en solución de tetrazolio durante 18-20 horas a 30º C.

Lectura de resultados

La lectura de los resultados del test estará marcando las características de los tejidos (que variarán según la semilla de que se trate), tales como:

• Tejidos viables sanos: tienen una tendencia a teñirse uniforme y gradualmente desde la superficie hacia el interior. Toman coloración rojiza.

• Tejidos viables pero débiles: la uniformidad y nitidez de la tinción varía en distintos tonos. A coloración más débil o tenue tienen un mayor deterioro de su viabilidad.

• Tejidos débiles pero no viables: toman coloraciones variadas, desde el muy intenso al incoloro, incluyendo la problemática central en la zona del germen. En ésta zona se marcan bien estos cambios.

• Tejidos no teñidos, muertos:

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