Tinción De Esporas

La cápsulas son estructuras situadas alrededor de la pared de las bacterias que confieren un cierta resistencia, su espesor es variable y su composición suele ser de carácter generalmente proteico; suelen teñir con cierta dificultad, por lo que los colorantes utilizados tiñen el fondo de tal forma que nos permita resaltar las cápsulas que quedan en las bacterias sin teñir; en el laboratorio se usaron dos técnicas para diferenciar la presencia o no de cápsulas, tinción negativa y tinción de Anthony. La tinción negativa consiste en la tinción del fondo con colorante ácido (nigrusína o tinta china) para dejar las células incoloras en contraste, la ventaja de este procedimiento, es que las células no reciben una agresión física o química; y la tinción de Anthony, en la cual, las bacterias primero son fijadas con leche descremada, después son tratadas con una solución de cristal violeta (p/p no recuerdo) por dos minutos seguido por un lavado con una solución de sulfato de cobre que imparte color azul oscuro al fondo. Se observa que las capsulas aparecen como halos ligeramente traslucidos y las bacterias teñidas de color azul, ligeramente en el centro, estas son coloraciones dadas por los colorantes ya que en el procedimiento el frotis no se fijo al calor.

La tinción de esporas o técnica de Shaeffer-Fulton está diseñada para aislar endoesporas por tinción ya que la envoltura de la endoesporas son mas complejas e impermeables que la envoltura de las células vegetativas en las que se forma; sólo se puede teñir el contenido de la espora alterando su envoltura y la impermeabilidad de las cubiertas dificulta que las endoesporas se decoloren una vez sean teñidas; para esta técnica se utiliza verde de malaquita que es un colorante débilmente básico, es decir tiene una carga positiva débil, y por lo tanto se une débilmente al microorganismo, penetra en las células vegetativas y en las endoesporas cuando se calienta la preparación; durante el lavado con agua, el verde de malaquita se elimina de las células vegetativas, pero no de las endoesporas. El colorante de contraste utilizado es la safranina que solo puede teñir a las células vegetativas que son decoloradas por el agua. El resultado son esporas teñidas de verde y células vegetativas teñidas de rosa, esto nos permite observar la forma, tamaño relativo y posición de las esporas en la célula vegetativa.

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