Tinción de Ziehl Neelsen

Tinción de Ziehl Neelsen

Fundamento

Las paredes celulares de ciertos parásitos y bacterias contienen ácidos grasos (ácidos micólicos) de cadena larga (50 a 90 átomos de carbono) que les confieren la propiedad de resistir la decoloracíón con alcohol-ácido, después de la tinción con colorantes básicos. Por esto se denominan ácido-alcohol resistentes. Las micobacterias como M. tuberculosis y M. marinum y los parásitos coccídeos como Cryptosporidium se caracterizan por sus propiedades de ácido-alcohol resistencia. La coloración clásica de Ziehl-Neelsen requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared bacteriana que contiene ceras. Al suspender el calentamiento y enfriar con agua, provoca una nueva solidificación de lo ácidos grasos de modo que el colorante ya no puede salir de las bacterias. Por otro lado, el calentamiento aumenta la energía cinética de las moléculas del colorante lo cual también facilita su entrada a las bacterias. Las bacterias que resisten la decoloración son de color rojo y la que no se ven de color azul, ya que se utiliza azul de metileno como tinción de contraste.

El procedimiento es el siguiente:

a) Filtre la fucsina fenicada antes de usarla.

b) Cubra la superficie del extendido con fucsina.

d) Elimine la fucsina con agua del tubo a baja presión, de manera que la película no se desprenda.

e) Gire la lámina para lavar su cara inferior y así eliminar la fucsina ahí depositada.

f) Cubra la superficie del extendido con alcohol-ácido al 3% efectuando un movimiento de vaivén y espere 2 minutos de modo que el alcohol-ácido lo decolore y arrastre suavemente la fucsina. Esta operación puede repetirse hasta que sobre el extendido se observe un color rosado.

g) Lave la lámina con agua según se describe en el punto d.

h) Cubra el extendido durante 1 minuto con solución de azul de metileno.

i) Lave ambas caras de la lámina con agua.

j) Seque las láminas a temperatura ambiente, en posición vertical, con el extendido hacia el frente.

k) Revise la identificación de los frotis y rotúlelos de nuevo si se borraron durante la tinción.

Observación microscópica

• La observación microscópica debe determinar la presencia de BAAR (concordancia cualitativa) y establecer su número aproximado por campo microscópico (concordancia cuantitativa).

• Considere campo microscópico útil aquel en el cual se observan elementos celulares de origen bronquial (leucocitos, fibras mucosas y células ciliadas). Los campos en que no aparezcan dichos elementos no deben contabilizarse en la lectura.

• Observe cada campo microscópico, en superficie

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