Trabajo: inmunología

INMUNOLOGIA

Condiciones necesarias para realizar una citometria de flujo adecuadamente.

• Una de las condiciones que se debe tener en cuenta para la citometria son:
• Las muestras deben de estar en suspensión liquida.
• Usar anticuerpos monoclonales para marcar a las células, marcados con colorantes fluorescentes.
• Tener controles adecuados para corroborar los datos obtenidos.
• Un control negativo en el cual se use un anticuerpo con el mismo isotipo marcado con el mismo fluorocromo pero que no reconozca ninguna de las moléculas de la superficie. (Para ver la efectividad de unión del anticuerpo)
• Un control negativo el cual tenga célula sin marcar con el anticuerpo (para determinar si la célula no tiene autoflorecencia)
• Un control positivo donde se use una célula que no esté relacionada con la procedencia de la muestra.

Diseñar sistema para detectar IL-2 soluble y determinar las condiciones.

• Usaría un ELISA sándwich para detectar la presencia de IL.2 en la muestra.
• Primero sensibilizaría la placa con un anticuerpo de captura, que reconozca a IL-2.
• Bloquearía sitios inespecíficos.
• Agregaría la muestra (suspensión de cultivo celular).
• Agregaría un segundo anticuerpo detector acoplado a una peroxidasa que reconozca de igual manera a IL-2.
• Un control negativo con un anticuerpo preinmune, Para ver que el primer anticuerpo este reconociendo a la IL-2 específicamente.
• Un control negativo con una muestra que no tenga IL-2.
• Un control positivo con una concentración conocida de IL-2.

Determinar las condiciones en una prueba in situ.

• Haría una inmunohistoquimica donde lo primero que haría sería permeabilizar el tejido.
• Agregaría el primer anticuerpo monoclonal anti IL-2.
• Bloquearía sitios inespecíficos para que el segundo anticuerpo no se pegue en otros sitios.
• Agregaría el segundo anticuerpo acoplado a biotina.
• Revelar usando el sustrato.
• Un control negativo donde se sustituya el primer anticuerpo por uno preinmune, para ver la efectividad del inmune.
• Un control negativo donde no se le agregue el anticuerpo primario, para ver el fondo que pudiera dar el segundo anticuerpo.
• Un control positivo donde se use otro tejido que se tenga el antecedente que tenga presencia de IL-2.

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