Origen De La Vida

GUIA # 3

MODALIDAD: Informe

MICROSCOPIO Y SU MANEJO

TECNICAS DE PREPARACIONES DE MUESTRAS

INTRODUCCIÓN

La biología es una ciencia netamente experimental, la que ha avanzado gracias a la implementación tecnológica, el éxito de su estudio depende de varios factores tales como la observación, el empleo de instrumentos y técnicas especiales; para lo cual es necesario apoyar las explicaciones teóricas con prácticas de laboratorio.

Los seres vivos presentan variedad en tamaño, forma, estructura, función, etc. El conocimiento de sus estructuras está basado casi totalmente en el estudio con el microscopio, el cual es un instrumento que permite la observación de objetos y detalles de estructuras tan pequeñas que no podrían ser observadas a simple vista. Con él, nuestro grado de visibilidad se amplía en cientos o miles de veces, gracias a un conjunto de lentes, dispuestos convenientemente. Las principales dificultades en la observación y estudio de estructuras biológicas son su reducido tamaño y su transparencia a la luz visible. Dado que el microscopio permite superar estas dos dificultades, su uso y el conocimiento de los principios y técnicas en microscopía, resultan fundamentales para el desarrollo de la investigación en ciencias.

Mediante un conjunto de lentes, el microscopio aumenta el tamaño de los objetos bajo estudio, que son demasiado pequeños para ser estudiados a simple vista. Dos principios están involucrados en el uso del microscopio: MAGNIFICACIÓN (la capacidad de aumentar el tamaño de una imagen) y RESOLUCION (la capacidad de producir una imagen nítida, o bien la capacidad del instrumento para dar imágenes bien definidas de puntos situados muy cerca uno del otro en el objeto). Existen distintos tipos de microscopios, cada uno con un propósito particular.

En esta práctica se darán los lineamientos generales para el uso del microscopio, empezando por sus partes; de igual forma aplicarán técnicas para realizar preparaciones microscópicas.

OBJETIVOS

• Identificar y reconocer el uso adecuado de cada una de las partes del microscopio óptico compuesto (ópticas y mecánicas)

• Operar el microscopio correctamente

• Realizar preparaciones microscópicas temporales

• Adquirir destreza en la preparación de cortes histológicos frescos sencillos

• Reconocer distintas estructuras celulares a nivel de microscopio óptico

FUNDAMENTO TEÓRICO

Tipos de microscopio a usar en el laboratorio

En el desarrollo de las prácticas serán usados 2 tipos de microscopios:

1. El microscopio estereoscópico, el cual es binocular, con aumentos de 4 a 40 veces, permite observar muestras opacas y realizar disecciones de estructuras en organismos pequeños, ya que en él puede manipularse la muestra mientras se observa. Proporciona una imagen tridimensional.

2. El microscopio compuesto, que puede ser monocular o biocular, permite obtener aumentos de 100 a 1500 veces. Los objetos a observar deben ser muy pequeños o cortados en láminas tan delgadas que la luz pueda atravesarlos. Estos se colocan en láminas de vidrio especiales denominadas porta-objetos y cubre-objetos. Las imágenes que se obtienen son bidimensionales e invertidas.

Funcionamiento del microscopio

¿Cómo se forma la imagen?

El microscopio compuesto consiste en dos sistemas de lentes, el objetivo y el ocular, montados en extremos opuestos de un tubo cerrado. El objetivo está compuesto de varias lentes que crean una imagen real, aumentada e invertida del objeto examinado, mientras que la lente ocular, actuando sobre ella, la hace más grande pero la deja invertida y virtual, es decir, cuando se mira a través del ocular se ve una imagen virtual aumentada de la imagen real:

El aumento total del microscopio depende de las distancias focales de los dos sistemas de lentes.

Poderes o capacidad del microscopio

Se podría pensar que al emplear lentes adicionales se lograrían mayores aumentos, pero en la formación dela imagen no solo es importante la ampliación, se requiere que la imagen sea nítida, para lo cual es necesario combinar los diferentes poderes del microscopio como son:

Poder de aumento: permite magnificar la imagen:

AUMENTO (A) = tamaño de la imagen/tamaño del objeto

En el microscopio compuesto la ampliación es igual al producto del aumento del objetivo por el aumento del ocular: A total = A objetivo * A ocular

Poder de resolución: capacidad de un sistema óptico de representar dos puntos próximos, distintos o separados, es decir, capacidad de los lentes de mantener separado dos puntos que a simple vista parece uno solo.

Poder de definición: permite formar imágenes claras con contornos definidos, es decir, que tanta nitidez presenta la imagen obtenida

Poder de profundidad o penetración de foco: permite observar varios planos en un mismo enfoque.

¿Cómo se prepara el material para su observación bajo el microscopio?

Tipos de preparación de las muestras biológicas:

El material a estudiar debe ser convenientemente tratado para que reúna las condiciones de transparencia, grosor y tamaño. Se lo coloca sobre un portaobjetos y si es necesario se añade un cubreobjetos. Las preparaciones citológicas pueden ser de dos tipos:

1.Temporales: se hacen en el momento y luego se desechan, son fáciles de preparar pero no se pueden conservar por mucho tiempo y no permiten estudios detallados.

2.Permanentes: se conservan por mucho tiempo, permiten un estudio profundo pero requieren técnicas complejas y prolongadas.

Técnicas comúnmente usadas en microscopía óptica:

1. Frotis o extendido: consiste en esparcir el material generalmente líquido o semilíquido de modo que quede distribuido uniformemente en una delgada capa. Para ello se utiliza un asa u otro portaobjetos de borde muy parejo que se desliza sobre el primero desde un extremo al opuesto.

2. Aplastamiento o “squash”: se coloca el material previamente ablandado entre porta y cubre y se presiona con fuerza aplastando. Se puede observar directamente o previa fijación y coloración.

3. Cortes: El procedimiento depende si se trata de preparados

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