Pasos De Extracion De ADn

Extracción de ADN bacteriano

Lisis: es el proceso es el proceso de ruptura de la membrana celular que produce la salida del material intracelular. La cual puede ser de dos formas. La sales caotrópicas ayudan a romper la estructura tridimensional de los ácidos nucleicos consiguiendo su desnaturalización. La adición de un detergente como el SDS ese necesaria para eliminar las membranas, (Microbial Sl, 2009).

Precipitación: degradación de la fracción proteica asociada al ADN. Se consigue mediante la adición de una proteasa. La fracción proteica puede precipitarse mejor con la ayuda de sales como el acetato de amonio o el acetato de sódico. El ADN es insoluble en alcohol por lo que se precipita en etanol frio o isopropanol y recuperarlo mediante centrifugación, (Microbial Sl, 2009).

Lavado: se realiza con alcohol en frio volviendo a centrifugarse. Este paso permite eliminar las sales añadidas en los pasos anteriores, para lo que se utiliza en etanol. En donde luego del lavado se retira el etanol al 70% y se seca la muestra a temperatura ambiente, (Microbial Sl, 2009).

Resuspensión: en este paso se conserva el ADN mediante agua ultra pura y conservado a -20oC,

(Microbial Sl, 2009).

Determinación de la calidad y concentración el ADN

La confirmación de presencia de ADN se lleva a cabo mediante electroforesis en un gel de agarosa y posterior tinción con bromuro de etidio y observación con luz UV o directamente al espectrómetro

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