Análisis del proteoma o del interactoma del cáncer

Con el análisis del proteoma o del interactoma del cáncer, se han identificado nuevos factores pronósticos del cáncer de mama, que hoy son utilizados en oncología clínica. Entre estos factores se destacan la presencia o ausencia de receptores de estrógeno (ER), progesterona (PR) y del factor de crecimiento epidérmico 2 (Her2) (4). Estos marcadores del proteoma tumoral se han convertido en datos fundamentales a la hora de clasificar el cáncer de mama, decidir tratamientos e incluso pronosticar la evolución de la enfermedad. Se sabe que la función de BRCA1 no solo es la reparación de rupturas en las cadenas de ADN, sino que también interviene en la regulación del correcto empaquetamiento del cromosoma X inactivo (5). Además su disfunción se relaciona con el desarrollo de cáncer de mama y/u ovario hereditario. En el trabajo de Gayle se pone de manifiesto la importancia de determinar el número de corpúsculos de Barr en el tumor para inferir el funcionamiento de BRCA1 en el mantenimiento de la estabilidad de la heterocromatina (6).

Ya en 1980 Smethurst y colaboradores plantearon una hipótesis en la que proponían una relación entre la doble dosis de información del cromosoma X en el tumor y el estado del receptor de estrógeno en el cáncer mamario (7).

Formulación del Problema:

Dado que la inestabilidad epigenética de la regulación de los corpúsculos de Barr en cáncer de mama es aún un proceso poco estudiado y que su entendimiento podría aportar para predecir la evolución de la enfermedad, proponemos determinar su número y el perfil proteómico del tumor y establecer si la pérdida de estos corpúsculos en las células tumorales es un marcador pronóstico para las pacientes.

Materiales y métodos

- Pacientes y controles

Se incorporaron 5 pacientes con cáncer de mama. Todas las pacientes firmaron un consentimiento informado aprobado por el Comité de Bioética de la Facultad de Ciencias Médicas de la UNCuyo. Luego de que el patólogo realizó la inspección de la pieza tumoral, se procedió a recolectar células mediante impronta en portaobjetos. Posteriormente las muestras fueron fijadas en etanol 100% durante 2 horas.

Las muestras controles, que fueron obtenidas de la mucosa bucal de cada paciente y de mujeres sanas, fueron utilizadas para la puesta a punto de las tinciones.

- Línea celular

La línea celular MCF-7 ha sido obtenida de un adenocarcinoma de mama y expresa receptor de estrógeno. Fue cultivada por triplicado en medio DMEM-F12 con 5% de suero charcolizado y 75nM de estradiol (Sigma E8875). Se realizaron 8 pasajes de 1 semana de duración cada uno. Luego de cada pasaje cada una de las tres muestras obtenidas fue teñida y se determinó el número de corpúsculos de Barr.

- Tinciones

• Tinción con Orceína

Se disuelven 2 gr de Orceína (Sigma 07380) en 45,8 ml de ácido acético,

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